在心肌分化期间源于鼠胚胎干细胞的HCN4阳性起搏细胞的鉴定，分离及特征鉴别

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题目：Identification, Isolation and Characterization of HCN4-Positive Pacemaking Cells Derived from Murine Embryonic Stem Cells during Cardiac Differentiation7 _" y: \7 _* s" y  S0 c" Q. }
      在心肌分化期间源于鼠胚胎干细胞的HCN4阳性起搏细胞的鉴定，分离及特征鉴别( M8 j9 c" t- m; X* j: l& a
作者：KUMI MORIKAWA, B.Sc.,*,a UDIN BAHRUDIN, M.D., PH.D.,*,†,a JUNICHIRO MIAKE, M.D., PH.D.,* OSAMU IGAWA, M.D., PH.D.,‡ YASUTAKA KURATA, M.D., PH.D.,§ YUJI NAKAYAMA,  PH.D.,¶ YASUAKI SHIRAYOSHI, PH.D.,* and ICHIRO HISATOME, M.D., PH.D.*5 E, G  t& R8 b* P8 K  {0 v6 T
摘要：背景知识：生物起搏器的开发是心律不整的一种很有潜力的治疗方法。基于他们特殊的细胞标志物----超极化激活的环核苷酸关卡蛋白（HCN）4，可从分化的胚胎干细胞中提取分离起搏细胞.本研究的目的在于用由HCN4启动子驱动的绿色荧光蛋白开发一种鉴别，分离及确定由分化的ES细胞而来的起搏细胞的特征的方法。
! x% c! Y" _% [) y4 B9 ?: \方法与结果：聚合酶链式反应（PCR）筛选机Southern blot分析揭示HCN4p-EGFP转基因被稳定的嵌入到小鼠AB1ES细胞的染色体中。RT-PCR和免疫染色结果显示HCN4p-EGFP ES细胞及其父辈的AB1ES细胞系的特定心脏起搏标志物有相似的表达。尽管HCN4p-EGFP转基因可能对一般的中胚层分化造成轻微的影响，但是其对ES细胞的多能性，心脏特异性因子及心脏收缩蛋白的转录，还有ES细胞分化成为起搏细胞的能力没有影响。电生理研究表明HCN4p-GFP-阳性细胞显示了自发的活动电位，以2mM Cs+处理时该电位会减慢，且表达超级化激活阳离子电流If.. \. m( a7 S. p% H" f4 U, n
结论：通过使用稳定的HCN4p-EGFP基因转染子的方法，可对ES细胞分化而来的起搏细胞进行鉴别，分离及特征鉴定。
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