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[请教] 如果细胞一直长着不传代会怎么样   [复制链接]

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包包
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金话筒 优秀会员

楼主
发表于 2011-4-7 02:53 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
干细胞之家微信公众号
我按文献上所说,培养成体间充质干细胞,可是四五天左右已经长得很满了,但文献上写得是要培养四到六个星期,老师的建议是这可能不是干细胞,要我每天换液,让它长到四五周的时候,别的细胞都死了,就剩干细胞的时候再考虑传代,不过现在细胞实在是太满了,这样下去对细胞不会有影响吗
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沙发
发表于 2011-4-7 03:42 |只看该作者
间充质??哪种要培养这么久的啊
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藤椅
发表于 2011-4-7 08:35 |只看该作者
快传代,在想法分离纯化
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板凳
发表于 2011-4-7 08:50 |只看该作者
这种等着其他细胞死掉而留下干细胞的情况是几乎不可能发生的。
4 H1 x  g' c" {6 y( b$ x8 b9 w8 M' X; o$ I. ~2 C
首先,你的细胞到底是不是干细胞不能通过生长时间来确认,需要观察其形态,然后做诱导分化来确认。" e$ Z7 d  q/ r- w" N6 U

4 C, D$ N& O7 }* Z" P+ R4 g建议你把现在细胞全部冻存起来,取出一小部分做诱导分化。* x5 i. A8 M1 k! u1 Q

" ]+ `6 X/ l# g如果诱导分化不成功,全部都丢了吧。1 l( ^& R: Z: S7 I

6 z4 b: ]) [* u: d7 f/ I( G如果成功,那确认是干细胞,复苏后开始纯化的道路。
4 g5 S' F  Y  b0 G! C2 [/ k
' F  J& z" S' J我以前也不确认,细胞在瓶子中长成了好几层,于是我就把每层都给分开,分别做诱导,然后发现中间那层是我想要的间充质干细胞。
- S6 l5 T( i7 p. [/ {1 x$ ]) N* V+ r" h
希望能对你有帮助。
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报纸
发表于 2011-4-7 10:18 |只看该作者
间充质干细胞可以经过贴壁分离方法逐步纯化。原代中混有杂质细胞比较多,所以你的培养中细胞比较多,一部分可以通过换液剔除,但也不乏可以贴壁的成纤维细胞等,故可以在细胞长满后,考虑传代,在传代中控制胰酶消化时间,可筛去一部分贴壁细胞,故需要培养到3-4代方可比较均一的形态
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地板
发表于 2011-4-7 10:19 |只看该作者
文献中是不是说的不够明白啊?我们都是先初步离心分离,培养四周左右,这期间是要换液和传代的,不过传的代次较少,1到3次即可,最后你会发现细胞形态非常单一,而且这也和培养液有关,要用对间充质干细胞选择性培养的培养基。细胞状态和活力决定培养的时间,如果所含的干细胞较少,就会以一个个小集落出现,能做的就是换液或加液,如果细胞太多,培养液也会被消耗,所以只能传代的。1到10代还是算原代细胞,所以不会影响你试验的吧?
& q- j+ D+ H0 W& A; D
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7楼
发表于 2011-4-7 10:27 |只看该作者
3天左右,即可传代,传代过程中即可纯化,培养四五周后,估计都凋亡了。
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8楼
发表于 2011-4-7 10:37 |只看该作者
培养时间是不能太久的,三四天就好了,不然细胞都老化了,就没有用了
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金话筒 优秀会员

9楼
发表于 2011-4-7 11:58 |只看该作者
呵呵,会发生生老病死的结果。精练的总结!
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10楼
发表于 2011-4-7 12:06 |只看该作者
感谢各位朋友的解答,让我学习了不少,谢谢
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