miRNA稳定转染及瞬时转染转染效率探讨 - 表观遗传学专区干细胞之家



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查看: 65915\|回复: 8	go miRNA稳定转染及瞬时转染转染效率探讨 [复制链接]

xuyq706

新手上路

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楼主

发表于 2011-4-7 09:07 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本人是新手，前段时间一直做了miRNA mimics的瞬时转染，现在想问miRNA瞬时转染与稳定转染在抑制效率上会不会有差别？

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沙发

发表于 2011-4-7 16:02 |只看该作者

差别还是主要体现在时间上了。瞬时转染的话，短期内会有很高的效率，但过了段时间由于不是稳定表达，所以会下降很多。而稳定表达则能长时间维持一个恒定的表达效率，就像细菌的质粒一样了，会随着细菌的增殖而得以扩增。

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xuyq706

新手上路

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藤椅

发表于 2011-4-7 19:59 |只看该作者

那瞬时转染后多少小时其抑制效率最高呢？我做了24和48小时，发现抑制率相差很大，所以想是不是要建立一个稳定表达的细胞系。

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amosummer

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板凳

发表于 2011-4-8 10:43 |只看该作者

差别大的话，还是需要一个比较稳定的转染体系！

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xuyq706

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报纸

发表于 2011-4-8 15:45 |只看该作者

回复 amosummer 的帖子: M. S6 \2 k3 n8 Z" c4 R
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嗯，谢谢！

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trl137

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地板

发表于 2011-4-10 23:14 |只看该作者

瞬时转染与稳定转染主要的差别在于时间。由于瞬时转染只是在48小时左右，时间较短，外源的miRNA在细胞内大量的扩增，所以效率高；而稳定转染，需要外源基因能够整合到宿主细胞基因组上，还能稳定的遗传，所以效率较低。

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xuyq706

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7楼

发表于 2011-4-12 15:48 |只看该作者

回复 trl137 的帖子9 p6 j6 Z5 o2 O* b# a1 Q0 z/ F9 T
* P. |4 ?! Y; M# R) I9 w6 [% G7 P
我的实验结果是不是24小时作用结果比较好，这也和以往很多报道不一样。

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trl137

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发表于 2011-4-13 21:08 |只看该作者

你做瞬时转染，就应该在24h-36h之间检测结果

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conggu

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9楼

发表于 2011-4-22 17:39 |只看该作者

如果是稳转的话，不是所有的基因都可以被knock down的。。。。

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