- 积分
- 1228
- 威望
- 1228
- 包包
- 1947
|
最近一直在做小鼠脂肪干细胞的分离提取与培养,用的是6周龄的ICR雌鼠。步骤如下:
2 N, c3 R+ @+ ?# Y, Z: X3 f 1、取腹股沟处脂肪组织,尽量去除可见的血管,用含300u青霉素、300ug硫酸链霉素双抗的DPBS洗涤3~4遍。; W% A# @! D# j; s& ^- Y: K
2,充分剪碎,用0.1%的一型胶原酶37度振荡消化1h。
; f. y( e: w7 J! n/ I: Q 3、10%FBS的DMEM培养基灭活胶原酶,200目尼龙纱布过筛。# t) u7 u L7 k& L* n; c
4、10%FBS的DMEM培养基洗涤3~4遍,含双抗,10%FBS、DMEM/F12培养基培养(0.5ml脂肪组织分离出的脂肪细胞置于一个35mm皿和60mm均做过),24h后换液。" d1 V4 S6 A4 _; a. O; t& X
5、每周换液2~3次,一般一周后长满,80%~90满时胰酶消化3~5min,1:2传代。2 `: n/ m& X* u
原代时的状态很好,但是传一代后细胞就老化了,不知道大家有没有遇到这种情况,又是怎么解决的,诚请指点…… |
-
总评分: 威望 + 13
包包 + 23
查看全部评分
|