新人想请教大家一些关于培养兔骨髓间充质干细胞的问题，谢谢

林达

大家好，我是学生，前段时间有仿照一些文献的方法从四周龄的新西兰兔的股骨和胫骨中取骨髓，用全骨髓培养法培养骨髓间充质干细胞，具体方法为：分离出股骨和胫骨；打开骨髓腔；用无血清的 L - D ME M培养基反复冲吸两干骺端骨髓， 把培养 基转移到离心管中；反复吹打制成细胞悬浮液， 以 12 0 0 r ／ mi n 离 心5 min ，弃上清液 ；加入 上述培养基后重悬浮,再以1000r ／ mi n离心5min；弃上清液，加含 10％胎牛血清的L — D ME M培养基重悬浮，接种于培养瓶中。。。以上是大概的实验步骤，但是第二天我去看细胞，发现很多漂浮的圆圆的细胞，据文献记载，可能是骨髓中的其他细胞，再过了2天，去看细胞的时候就发现培养液变浑浊了，而且用倒置显微镜观察时发现培养瓶底壁有大片的不明物，长的像海藻一样，又有点象絮状，上面有一颗颗的小圆状的不明物，。。到现在已经有8，9天了，培养瓶底壁用肉眼看有白色的东西，用显微镜观察时还是大片的丝状的不明物。。。
" v8 H5 [( W! k4 o4 Q   打扰大家了，谢谢大家的时间，我想咨询下有没有人也培养过兔骨髓间充质干细胞的啊，有没有遇到类似的情况，我这样的情况有可能是什么原因呢。
# j- t6 g: ^) |1 q# H' I  麻烦了，有劳

细胞海洋

建议上图

wwk865

浑浊。。。不明物。。。你有没有加足够的抗生素。。。会不会是被污染了？

wwk865

浑浊。。。不明物。。。你有没有加足够的抗生素。。。会不会是被污染了？

飞翔的十字架

很可能是污染了

林达

回复 细胞海洋 的帖子
1 ?! X  A" F! ]! K2 D/ z- T! |6 i% Q  l4 Z! l; |
好的，我找找，呵呵，谢谢你了

267318024

有几种情况，1 操作不规范，细胞发生污染；2 你取细胞后只是离心，没有过滤的，所以有可能是骨髓里面的其他成分，具体是什么说不清楚，我遇到过，这种情况，换液几次后就没有了；3 细胞离心后重悬的次数过少，细胞没有冲散，聚集在一起，部分细胞死亡后出现的现象。
' h: t4 w7 d8 p2 l3 {6 T建议：购买一个滤网，我买的是BD公司 70um的，过滤后再离心，然后重悬，可以重悬几十次，细胞不会死的。还有一点就是个人经验了，我养细胞的时候，取了前5天是没有去动的，没有换液，5天后第一次换液，细胞生长很好，你也可以试试。

林达

回复 wwk865 的帖子( @$ m3 R- {- P- H/ `- O
4 e5 Z% ~: E4 T. Q9 N! P
培养液配制的时候都有加抗生素的哦，到现在的话培养瓶中的培养液还是较澄清的，没有变浑浊呀，而且瓶壁上有白色的一层，貌似是有细胞的长势。。。但是倒置显微镜观察的时候就发现了大片像海藻状，又有点像絮状的，上面有一颗颗圆圆的东西。。。匪夷所思啊，是菌？那么为什么培养液不浑浊呢。。。是细胞？那为什么没有细胞的形态呢。。。头疼啊。。。
) X: I+ ?0 E! M1 n5 {  呵呵，非常谢谢你的回复，耽误你的时间了，

林达

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7 q7 r# E; o6 ?' Z7 @- \1 B
5 y  x2 S! I9 m7 E3 `呵呵，谢谢你的回复。但是为什么现在细胞培养液没有变浑浊呀，如果是污染的话，好像会变混的哦。。。

林达

回复 267318024 的帖子7 o* O3 a, G5 K0 o% L
# T: ~. v' W! P' J5 ^% d
呵呵，真的非常谢谢你耐心的教导，对我很有用的哦，呵呵，我会用你建议的方法试一下的，谢谢你了。# B- G- u; J) k; J) E& b$ b
  祝好。