求胶原酶Ⅰ的配方？？

zerollx

    大家在分离脂肪干细胞时的胶原酶是怎么配的啊？有的直接用DPBS溶解，有的添加适量的BSA，也有的用无血清培养基配，大家都是怎么做的，跪求详细步骤...

baiyunrui

用血清培养基配要好点吧！我是那样做的！好像那样能更好保持其活性！

zhuanzhuan

I型胶原酶，常用的是用培养基配和血清配的，先用培养基溶解，过滤后再按照体积加入一定比例的血清，一般是20%的血清，然后分装，-20°保存，用之前融化。一般不反复冻融。

zerollx

5 t1 H& L( W" \  u3 q1 T, K/ C7 q; b9 M- k! O
回复 baiyunrui 的帖子
$ y  R/ \7 u5 r1 ]# Z- Y/ C& K3 ?
% I+ Y# b. V3 {& [, X$ p1 R( `/ P6 ^血清不会像胰酶一样影响胶原酶的活性么？DMEM用的是高糖的还是DMEM/F12？

zerollx

  i: _* h" v) U$ T5 d
3 H' i' I6 s5 m( h! {% x
回复 zhuanzhuan 的帖子' j, I9 g% p+ i0 N
  [) H) y; }7 N5 r0 `0 D, M3 B
血清不会像胰酶一样影响胶原酶的活性么？DMEM用的是高糖的还是DMEM/F12？

临床干细胞

zerollx 发表于 2011-4-24 09:09
2 b- q: q1 g$ A3 I回复 zhuanzhuan 的帖子
; M( T  S, \4 V  {0 m* n
' b% g7 ]$ a* i" Y5 H1 {血清不会像胰酶一样影响胶原酶的活性么？DMEM用的是高糖的还是DMEM/F12？

- @. c% W/ W% @) M6 r; {  l养干细胞一般不用高糖

zerollx

回复 临床干细胞 的帖子
2 A, v1 m8 ^" j0 Y9 h6 O6 L# N7 d* Z6 y# Q+ e0 U! r7 A7 h( @
嗯，我在后期培养中用的是DMEM/F12，是低糖的，我想知道的是在胶原酶消化的时候用于配制胶原酶的培养基是高糖的还是低糖的？

牙牙丫丫123

回复 zerollx 的帖子
9 G# E- |$ C) p) x: E* Z$ D1 d, @- Q1 P8 M2 ~( x! ~& z
一般是用无血清的培养基好一点，直接配置你所需要的浓度，然后用DMEM溶解

牙牙丫丫123

一般是用无血清的培养基好一点，直接配置你所需要的浓度，然后用DMEM溶解

zhuanzhuan

我们用IMDM，有时候也用PBS，主要看你是什么细胞哦。胶原酶在原则上不能被中和，只能稀释。血清补影响胶原酶的活性！