怎样提高度包毒效率

yangpan521

     我老板吩咐我这个月要把包毒效率提高到90%，再293状态 好的情况下，我已经能包到80%，请各位指导一下，怎么办？

wwy551

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个人觉得首先就是保证包毒细胞的状态要好，细胞铺展开，不聚团，包毒的时候细胞的汇合率达到80%~90%。考虑到质粒进入细胞合成病毒，细胞就不再生长了，到细胞不再生长的时候，基本上也已经长满了整个培养皿。) k# n4 F7 h" j3 Y7 ~+ T$ C
其次，保证包毒用的一套东西没有问题，比如：包毒用的质粒尽量是大提出来时间不太长的，没有反复冻融过的，避免质粒降解，长期冻存的质粒也会降解，用之前最好重新测浓度；包毒用的HBS和氯化钙形成沉淀没有问题等等。

sheepthief

正准备包病毒，留个记号，呵呵

痞子的烟头

细胞、质粒浓度纯度、转染如磷酸钙转染法（包括中间操作）等需要自己摸索！感染时加polybrene或鱼精蛋白

christophe

大提的质粒质量要好，细胞要处在指数生长期。磷酸钙转染的时候，HBS的PH值也很重要，一般要精确到百分位，我们实验室用6.95-6.98之间，所有的试剂要进口的。同时形成的磷酸钙沉淀不能太大，要均匀。具体还需要自己多做几个条件对比一下。

yangpan521

大家都是用磷酸钙法呀，有没有试一下脂质体呀，那个方法时间太长，另外，我有一套包装载体，只感染了一次，受体细胞就有了克隆，当时还不知道，老板看后说是克隆，也不知为什么这么快就出现了克隆，请高人指导。