请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

深海寂寞鱼

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  to 生物化学zy：
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  一看就知道是高手啊。顶礼膜拜ing......; k2 b& `) X" A+ @6 p
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  不知道口服液的瓶环具体指哪一部分，我有点没搞明白。再一个请问您是如何将自制的克隆环，固定在皿的底部的？6 y& v& e$ n* i4 g. R' ~
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   由于我通常都是用200ul枪头直接挑克隆 或者 用有限稀释法，没太用过克隆环的原因就是克隆环的固定和密封性问题。2 h; g  b2 O8 a/ e; r" P% T8 d7 \
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   还希望您能指点一下。谢谢了！

xiangchou812

回复 生物化学zy 的帖子/ t! o9 g- u6 s) o0 \  {
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谢谢。很好的方法

daviddow

上面的好厉害，能不能在具体一下降解你们试验挑取克隆的方法？

生物化学zy

回复 深海寂寞鱼 的帖子% N/ h( G" j9 d/ T9 @
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就是那种口服液的瓶颈的部位.拿下来之后就是一个环.挑克隆时将其轻轻的放在克隆上,一般的经验是那个大小刚好把克隆套住,放在上面就行,不要再动,之后加酶就行,整个过程不要再动克隆环,以免细胞丢失.

深海寂寞鱼

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     再请教一下，你说的瓶颈是指的玻璃的那部分吗？还是开口的那部分金属环？
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     还有你把自制的密封环放在皿里以后，怎么包装密封性？9 t, T$ b# U$ `$ O! H* d) H; V$ c
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     我们一般是用一种密封胶，但是不太好用。+ y0 i6 o4 u: J5 N. l/ t7 G1 t0 B

+ X) G: ]# e' z6 v; Y0 L     希望您可以详细的给我讲讲。谢谢啊！

lifeida

我们一开始用10cm皿筛选，单克隆长出来了，我们用胰酶消化，但不好消化，如果两个单克隆靠的很近的话，很容易消化到周围其他克隆，后来我们就用机械法来挑克隆（就是拉根玻璃针，在体式显微镜下温柔地搓起来），效果不错，能挑到很纯的克隆。后来嫌这个10cm皿麻烦，就用48孔板，我们一般一个孔（6孔板）传到6个48孔板中，密度大概10%或更低，长到30-40%，开始加G418筛选，等长出单克隆时，加胰酶消化传代，这个方法有个缺点，48孔板有的会长出多个克隆，这样消化下来的话是多克隆而不是单克隆，因此，如果转染效率高的话，接种密度低一点，长出来的单克隆会多点。

生物化学zy

回复 深海寂寞鱼 的帖子7 S5 B2 h$ z; _0 v
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是玻璃的那部分.自制的一个一个环,然后全部清洗,晾干.装在小烧杯中,包好,160度2h灭菌.
- Z* s' o7 ~, I5 m保存.  你挑克隆的时候可以在显微镜下用marker把克隆标出来,就是画个圆圈,标出位置,用镊子夹住克隆环,轻轻的放在那个圈上,不用密封.轻轻的加入胰酶,消化就行,就是整个过程中不要让克隆环移动就行.

xiangchou812

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" u7 v- m! [6 {/ l7 s: H" M% _! F7 Q- I  S9 G$ _7 ]
玻璃的哪部分？不会是把瓶体砸下来，只留瓶口？用的时候倒过来？这能取到那么好的么？不知你们用的是什么口服液瓶子。: v" e3 E5 Z* H+ R4 l2 {
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欢迎大家继续讨论

军医

回复 生物化学zy 的帖子1 A8 K/ E# C% q1 c* r3 y
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很好的方法

biovictor

如果实验室有足够的经费，可以选择做一些微流芯片，高效省时省力，可以很方便的筛选所需克隆。这里有一些介绍：
: {- }7 w) m( Z　微流控芯片技术(Microfluidics)是把生物、化学、医学分析过程的样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块微米尺度的芯片上， 自动完成分析全过程。由于它在生物、化学、医学等领域的巨大潜力，已经发展成为一个生物、化学、医学、流体、电子、材料、机械等学科交叉的崭新研究领域。报告介绍微流控芯片技术领域国际最新发展，结合报告人多年微流控芯片研发成果，介绍一套完整而独特的芯片制造工艺技术，以及多种不同应用的微芯片。2 a! P* n+ M3 e. h8 C/ h" {
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