请教心肌细胞的原代培养的注意事项？

shuixiao

最近几天想做一下小鼠或者大鼠心肌细胞的原代培养，请问哪位仁兄之前做过，要注意那些地方，比如用到什么酶，多长时间贴壁，等等？ 小弟之前只做过骨髓间充质干细胞的原代培养……请各位高手指教！

SCNT

首先要说明你是用的胎鼠还是成年鼠，以及你想用组织块法还是消化法等信息之后才有针对性解答

大少爷

呵呵 求教一下 骨髓间充质干细胞的原代培养呗

czzhaozhu

我曾经做过新生大鼠的原代心肌细胞的分离和培养，具体步骤如下：
9 e1 p7 l- B$ x. U$ {1. 取1-3天的新生SD大鼠投入75%的酒精，30秒后取出，眼科剪剪断肋骨，取出心脏，放在PBS中；
3 |4 j" U+ o/ t4 g% Q, w2. 清洗后，剔除血块，将组织块剪碎，加入0.25%胰酶消化数次后，终止消化，直至组织块完全消化干净；
5 n# _( h! Q0 E7 _, n% {8 }3. 过筛网后，离心，弃上清，重悬细胞，将细胞悬液分成两部分，一部分差速贴壁小时，另一部分用Percoll密度梯度离心，1500g，30分钟；: ^: X7 K* x3 h' g2 ~" y4 F# j
4. 收集各层细胞，在含血清的H-DMEM中培养。

细胞海洋

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lidaifu001

我曾经做过新生大鼠的原代心肌细胞的分离和培养，具体步骤如下：3 Q+ {# A- l" n' C, X* A
0 S) {- K- V4 _- u1. 取1-3天的新生SD大鼠投入75%的酒精，30秒后取出，眼科剪剪断肋骨，取出心脏，放在PBS中；
7 i8 {  e8 F  E$ z7 W9 O# D, Z# b5 [! @! g; r. u# r( ~$ C$ |2. 清洗后，剔除血块，将组织块剪碎，加入0.25%胰酶消化数次后，终止消化，直至组织块完全消化干净；1 L6 C0 P5 Z4 W  [! j) ?6 Z5 s) O# L+ w
3. 过筛网后，离心，弃上清，重悬细胞，将细胞悬液分成两部分，一部分差速贴壁小时，另一部分用Percoll密度梯度离心，1500g，30分钟；, L/ z. X0 ~- ~
/ r4 n. i+ l) g/ Z, B: j4. 收集各层细胞，在含血清的H-DMEM中培养。

7 V* m/ M; O# `# Z; ^( |" p2 t" z$ f
我用的是胶原酶法消化的。