求卵巢颗粒细胞生物学特性

lianzhimin

小的想培养一些颗粒细胞，但是小鼠的卵泡太小，在体视镜下做了一次穿刺法取颗粒细胞，像伸长脖子的鸭一样在镜下花了一个小时刺穿卵泡，结果卵巢面目全非，香消玉损，而我的鸭脖脑袋已经变成刚探头的乌龟样，颈项僵硬，两眼无神，一脸无奈与失落，哎！什么也没得到。自知是自己技术问题，但还是想问问有没有其他分离方法？比如通过消化贴壁差速，或者传代消化差时的方法等。求各路英雄好汉指教一二！！！

aulenuyah

你可以这样：取小鼠的卵母细胞会吗？？就是从小鼠输卵管的壶腹部取小鼠的卵母细胞，在输卵管液里成熟培养，等颗粒细胞扩散后，吹打均匀，吸取悬液，接种就可以了。
' u! [$ l/ R" O8 u7 @  k不过事先提醒你一下哦，颗粒细胞培养的时候很容易发生老化，要想办法克服哦，呵呵

xiangchou812

你刺破卵泡后用PBS洗一下，液体里肯定会有不少卵丘卵母细胞复合体（COCs)，离心收集后用透明质酸酶消化一下再培养

鹤顶宏

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8 U, p4 M2 }8 ~5 B0 c/ H, P0 f( B
& n4 k" P( W6 e, ?- ?' A不知个老化问题如何克服呢

lianzhimin

多谢诸位好汉出手相助，小的这就速速去办！

aulenuyah

回复 鹤顶宏 的帖子8 F: n& `6 d% I" F; h1 B

/ n+ g6 v' a& O) y- M8 F" _这个还真不好说，要手感的，语言无法形容，呵呵。少折腾细胞吧

moluxingke

你对需要的颗粒细胞有什么要求吗？卵巢是比较小，如果要求不是非常严格的话，可以对小鼠先进行激素处理，如对21d左右的雌鼠注射PMSG 46-48h后再取出小鼠卵巢，这时候许多卵泡变的非常大，在镜下刺起来就比较容易一些，然后挑选那些带颗粒细胞的卵母细胞，可以酶消化处理，也可培养一段时间，然后用枪头吹打，颗粒细胞就会被吹散，你除去卵母细胞，剩下的就是颗粒细胞了，严格来说大多是卵丘颗粒细胞。

lianzhimin

回复 moluxingke 的帖子: c0 _' t, ~8 C) O2 N

0 g; C, n% y+ l7 D0 Q: t我想拿颗粒细胞和胚胎干细胞共培养，看诱导效果。你说的方法我在外文的一篇文献中见过，可行性差，细胞和我都快被折腾死了，收到的量少，且易污染，有没有不刺穿的方法分离？
9 m; V# b$ q$ `

细胞海洋

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8 F5 ~* A- X  j
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moluxingke

回复 lianzhimin 的帖子4 n* t5 g% o3 M. W
3 C0 m' ]' |% m$ D9 Y3 o
嗯 这个我还不太了解，不好意思。
2 h7 P4 @; G$ z0 D& y1 b/ E1 I如果不穿刺，我觉得很容易有其他细胞污染，毕竟卵巢里面还有膜细胞、基质细胞、表皮细胞等成分。如果是细胞死亡的太多，你可以在培养基里面穿刺然后收集，如果比较熟练的话速度够快，应该没有问题的。