胚胎干细胞的计数问题

always_wp

怎么给小鼠胚胎干细胞计数呢？我想做移植，但是要计数，是数克隆的数目么？怎么数呢？

subenjinwo

一般使用血细胞计数板计算细胞个数。

always_wp

是啊 可是有了饲养层 消化了之后 怎么数啊 数出来的是饲养层和干细胞的总数啊 我只想知道 干细胞的数目 是不是 不能消化 直接数克隆呢

大少爷

一般用专用的细胞计数仪。将你所获得的小鼠胚胎干细胞收集到一起，加入适量培养液定容到一定体积，混匀。取1ml，一般再稀释10倍，取50微升加到计数仪样品杯计数。我们用CASY-DT快速细胞计数及活率分析仪，既可以计数，又可以测细胞活率。用血细胞计数板计算细胞个数太麻烦，而且不准。

yangpan521

应数克隆数，很多情况消化时都成单个细胞，数克隆基本可以确定是由单个细胞长成，本身克隆细胞也长得较快7 B, k6 H$ E) C" e

always_wp

回复 yangpan521 的帖子1 V) C  U, Y2 }
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“应数克隆数”我的理解就是，要在镜下数克隆的数目了，怎么数完呢？不然要是消化了 就和成纤维细胞一样混在一起了，都是圆圆细胞的样子，数了也是不对的吧。
2 Q: H& d3 t  F8 T! p“很多情况消化时都成单个细胞，数克隆基本可以确定是由单个细胞长成，本身克隆细胞也长得较快”是什么意思啊 与细胞计数有什么联系呢？
" A" d5 ~5 I) t9 u' [$ H4 V8 M给解解惑吧~！

always_wp

回复 大少爷 的帖子
; t2 F. X: N2 m7 t# v8 P0 d
7 h/ U# p7 {) z. [我现在的疑问不是计数麻烦的问题 是我的胚胎干细胞是长在成纤维细胞上的 消化了计数 都是圆圆的细胞 怎么知道哪个是成纤维 哪个是干细胞呢 就是数了也混在一起的
/ L( Y5 I7 j% _+ S怎么弄

大少爷

那在培养的时候就应该想办法将成纤维细胞去除，如果是少量的话应该没关系

wxyWXY

应该消化成单个细胞  用血细胞计数器计数 0 |* F2 M; c' G$ z( j6 n
方法一  胚胎干细胞单个细胞是很小很圆的 比较亮  mef比较大 比较暗  很容易区分; \5 Q/ g/ c+ s- G% s
方法二 消化成单个细胞后  加上一定培养液 放在细胞培养皿中静置半小时左右（放在培养箱中）  轻轻晃下吸出上清  也就是差异贴壁法  效果不错

yangpan521

克隆细胞与饲养层细胞是有区别的，饲养层细胞较大，ES细胞较小，且比较圆，表面光滑。消化时可以用细胞计数器，饲养层有的成团，ES基本都是单个的，很好就可分辨两者。本人经验可参考