参加2011年6月3日同济大学干细胞技术临床转化应用讲座的一点体会：

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回复xiaogao帖子： 肖磊自己在会上演讲时说免费提供人ESC，并建议多用国内自己建的细胞。现在国内文章大多用国外建的ESC。他说目前世界上建了约1000株人ESC，中国约300株。他給了邮箱：leixiao@zju.edu.cn.
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hualin840518

不错+ r- j7 M# q  B+ X
顶一个！

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会议发言者钱其军、卫立辛、金颖、唐九红、沈晓华、赵旭东同意将演讲幻灯由会议组织者发给参会者，其他演讲嘉宾不同意将幻灯发给参会者。MedSci的代表陈鹂也将幻灯发给组织者，该公司能帮助修改SCI论文和基金申请书，以后可花钱请他们代写论文和申请自然科学基金（国外也有这样的专业代笔公司，写出的论文的确专业！），是否以后实验也可请他们代做，毕业论文也请他们代写？
" ~+ \6 K) R# `( |- h! c* ^; h现将卫立辛的演讲幻灯发给大家，但仅限干细胞之家使用，请不要转发。我看了他的幻灯片，做的很精美，没什么保密的，也有新意，对未参会的同学可能有所启发，因此上传。我相信卫立辛教授会同意我的做法。

gact

向肖磊索要病毒载体、包装质粒之类的，会给么？

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7 H) g4 w  @) S* |, [4 t" E% E8 a! P. o6 g
估计载体之类不会给，除非你们有合作关系。我认为他的human ESC需要验证和国际认可，因此愿意免费提供。上述帖子有他的邮箱地址，是他在会上给大家的，你可与他联系。

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2 S% I( @# T5 o+ l) T- P
) a: D' z& F" H, w: _6 mTpwang的分析很精辟和专业，的确有些会议组织者是为了完成任务（申请课题时有组织会议的要求）、拉关系、盈利等为目的而办会，而不是为了提供交流、合作的平台。
; j) C+ x/ k5 O0 d9 k8 v/ G0 {9 R" W- M3 y8 y3 N! I
对于嘉宾老调重弹的问题，我觉得不是很有必要。有些嘉宾开会前几小时才到，演讲完立即飞走。反复介绍本实验室的看家工作是可以的，但不要以此为主。我觉得某些嘉宾为演讲所做的准备时间是非常有限的，若不精细准备、让观众有所收获，恐对不起参会者所花的时间和经费。比如参会的某嘉宾每年自己实验室的运转经费500多万，手下40多人，研究方向也一定很多，随便拿一两个出来讲就可以了。国外的嘉宾也是经常演讲，但每次题目、内容都不同，很少能见到一个题目反复讲的。" R, d! S; j% [9 b* P1 A$ x

0 P, {, I1 X6 }在目前情况下，会议组织者完全可以做的更好一些，而且非常容易。比如：让嘉宾吃饭时与参会者坐在一起吃饭，以利相互交流，而不是让嘉宾们单独在一个房间内吃饭。会后允许嘉宾与参会者有一定的相互交流的时间，不要嘉宾象故意躲避参会者一样，演讲完就找不到人了。晚饭会务组也应提供，以利参会者相互有更多的交流、互动的时间。国外就有一些学术会议，没有大会报告，把大家组织在远离城市的某度假村，让大家在每天的日常活动中相互交流和启发。
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scienese

20110604
4 V" f" k5 ]8 s1 y% u# z( b/ C金颖老师讲课总结
2 N$ F* o8 Z1 s. c# ZStem cell 定义：self-renew 、differenation
7 i% o& Q$ S- n+ P9 G; w八细胞之前叫全能干细胞（totipotent），之囊胚叫亚全能干细胞（pluripotent），再往下叫多能干细胞（multipotent）如造血干细胞和单能干细胞（unipotent）如皮肤干细胞。
7 F. M% }5 _. A$ R9 c* P6 m
( ]# x/ [8 s, `, Y: F在胚胎着床以前叫胚胎干细胞（embryonic stem cell）在着床以后叫epiblast。3 |) [2 A& F9 r4 ]) t! P) ^

7 o; P+ u% L0 p, E- W分离胚胎干细胞有两种方法：免疫外科法，机械法  机械法难度高耗时耗力但金颖老师实验室使用此方法，免疫外科法 要掌握好补体配体的浓度以及作用时间0 R, ?% Z$ ?2 {
9 @9 q8 Q3 ]- Z+ ~) f" t
分离胚胎干细胞最重要的一条是要找到优质的胚胎，周围滋养层细胞呈半月形时最好，将内细胞团剥离后放置于滋养层上7-9天后看有没有clone长起来，如果没有可以延长观察时间至两周，把内细胞团放置于饲养层上前两至三天不能看（place ICM on to feeder layer）防止内细胞团漂浮或与feeder 贴不紧。
2 f3 }0 A/ E) B' V$ A% Q- r
; k: R- P( l0 s& t5 Y维持胚胎干细胞多能性的三大关键因素：a饲养层细胞，饲养层细胞密度很重要 有的胚胎干细胞系喜欢密的有的则喜欢较稀的    b  bFGF 最佳浓度为4-8mg/ml   c传代 胶原酶 胰酶 机械法 金老师提倡用机械法 因为胰酶处理后对细胞伤害特别大 很容易就分化 胶原酶也不提倡 金老师实验室的学生传一个6cm 需要两个30min 特别辛苦
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% L* [! l0 A, a: c细胞分化研究包括三个方面:1,形成拟胚体（EB）拟胚体内就有三胚层细胞  2，co-culture with other      3，monolayer culture with defined medium# ]/ S9 `+ P) |# l5 f
0 p; }9 V; t- r, R/ U  n
鉴定胚胎干细胞工作9 [4 @" o9 B: Z' r
核型正常
" o- D4 i3 ]4 \* [# v3 ]能传超过70代次+ I3 Z* z5 t( x: E
能冻存和解冻  人胚胎干细胞不能消化成单个细胞保存 单个细胞特别容易死 每解冻一次都像从新分离一次
8 s1 v  F8 j& n  e/ K自我更新
. D  z& [) `8 j# I3 E8 Q表面标记检测，包括 Real-time、免疫荧光、基因表达谱分析6 V$ @- ]/ {) k1 x6 `  G: J
端粒酶活性
* a" G9 d/ e( U畸胎瘤6 p* k2 Z9 W8 W; p# F
嵌合体动物$ ~% a; U6 Z: D' `0 e
2 P. e- q2 b5 F8 `. {2 a
康九红老师主要讲了Chip技术 利用转录因子chip-seq和核小体分辨率chip-seq 一般能将发挥某一功能的转录因子缩小至3-5个转录因子
  P9 G1 {' A. r# e7 C; r. p& v1 F( L7 n0 Y% I5 w( G2 j- W. f/ j
还讲到甲基转移酶 不同的甲基转移酶参与不同的甲基化反应  有的甲基化有利于胚胎干细胞分化，有些甲基化则能使成体细胞重编程9 e- j9 k8 Y. ^: U: k7 H
6 j# m: @' G# v6 |# J! ^) a
下午
% D7 o* M, x2 M# c9 ~' |1 d, }5 b0 `+ s9 M  j, p
周琪老师讲干细胞的多能性和安全性6 C" f) d4 m5 C5 G- r5 S3 F  c
周琪研究组还在尝试做猪的胚胎干细胞% x# [2 @2 f" V$ Z$ X* L

( l  h0 z3 l; q1 i7 [4 x        Oct-4        SSEA-1        SSEA-3        SSEA-4        TRA-1-40        TRA-1-810 D7 V6 _; c; b4 c' [# J* q. k% e2 f
Mouse* u$ S7 t* D2 g$ s- F- s7 \% a
ESCs         +        +        —        —        —        —8 j8 ~3 I6 s5 e: j
Rabbit) E) v# g) ]+ K9 x& D: i" V4 w
  ESCs        +        +        +        +        +        +
& {) C: n/ C; S4 g  d3 p+ Z& oMonkey0 v: }, a, A% I. ?+ c( }  ^8 T# K
   ESCs        +        —        +        +        +        +4 Q  A& o) E3 p" \* s
Human- S* ~) l' ?6 }/ M+ `: f' m
  ESCs        +        —        +        +        +        +
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. J# k0 t1 v  Y0 @- y8 @
: H! ^1 f% s0 Q9 Q4 ~2 g: w" v赵春华老师
6 O. g" f$ b+ h; n. @( r: z+ p/ `
, {$ ?& b! u+ @' q/ KDKK 抑制wnt 通路beta-actin  是通过激活nanog 来对beta-actin发挥作用 已发表 可查
1 T7 B- D' ]" _

xiaogao

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4 c* W! Q  Z8 V, O+ }) q$ q0 O, Q/ x; g- c# A' Q9 v# d
    4月份在杭州的那个干细胞会议，肖磊老师也讲了他实验室建的系，但是没有说可以提供，好吧，有机会问题要一些来

xiaogao

回复 scienese 的帖子. j% C6 Q! z* Z" w5 g" [

+ E5 {* H5 J  F) a' ~     本来对康九红老师的表观研究挺有兴趣的，但是他好像只是讲了一下ChIP-seq技术我们知道的东西和实验的细节，没有对我起到启发作用