参加2011年6月3日同济大学干细胞技术临床转化应用讲座的一点体会：

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回复xiaogao帖子： 肖磊自己在会上演讲时说免费提供人ESC，并建议多用国内自己建的细胞。现在国内文章大多用国外建的ESC。他说目前世界上建了约1000株人ESC，中国约300株。他給了邮箱：leixiao@zju.edu.cn.- S0 l1 T5 ?8 E  m' t! b+ D

hualin840518

不错
6 H$ W$ o0 s0 |6 l顶一个！

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会议发言者钱其军、卫立辛、金颖、唐九红、沈晓华、赵旭东同意将演讲幻灯由会议组织者发给参会者，其他演讲嘉宾不同意将幻灯发给参会者。MedSci的代表陈鹂也将幻灯发给组织者，该公司能帮助修改SCI论文和基金申请书，以后可花钱请他们代写论文和申请自然科学基金（国外也有这样的专业代笔公司，写出的论文的确专业！），是否以后实验也可请他们代做，毕业论文也请他们代写？
- |# z! m4 Z( f7 c% X) u; w现将卫立辛的演讲幻灯发给大家，但仅限干细胞之家使用，请不要转发。我看了他的幻灯片，做的很精美，没什么保密的，也有新意，对未参会的同学可能有所启发，因此上传。我相信卫立辛教授会同意我的做法。

gact

向肖磊索要病毒载体、包装质粒之类的，会给么？

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% |* K# P' r0 n+ n# ^0 x' S. z/ c& r, K: Z: H
估计载体之类不会给，除非你们有合作关系。我认为他的human ESC需要验证和国际认可，因此愿意免费提供。上述帖子有他的邮箱地址，是他在会上给大家的，你可与他联系。

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/ N2 W: Z: s& `# u1 u
) W8 a, p/ r% @; d  Q5 v6 STpwang的分析很精辟和专业，的确有些会议组织者是为了完成任务（申请课题时有组织会议的要求）、拉关系、盈利等为目的而办会，而不是为了提供交流、合作的平台。$ \/ x" q$ U0 R6 I: I
; x, ?$ X; l: Y! o0 [  u; N
对于嘉宾老调重弹的问题，我觉得不是很有必要。有些嘉宾开会前几小时才到，演讲完立即飞走。反复介绍本实验室的看家工作是可以的，但不要以此为主。我觉得某些嘉宾为演讲所做的准备时间是非常有限的，若不精细准备、让观众有所收获，恐对不起参会者所花的时间和经费。比如参会的某嘉宾每年自己实验室的运转经费500多万，手下40多人，研究方向也一定很多，随便拿一两个出来讲就可以了。国外的嘉宾也是经常演讲，但每次题目、内容都不同，很少能见到一个题目反复讲的。
; K) u5 G. K: {" L2 z
" k% t* g( x9 z, z, H在目前情况下，会议组织者完全可以做的更好一些，而且非常容易。比如：让嘉宾吃饭时与参会者坐在一起吃饭，以利相互交流，而不是让嘉宾们单独在一个房间内吃饭。会后允许嘉宾与参会者有一定的相互交流的时间，不要嘉宾象故意躲避参会者一样，演讲完就找不到人了。晚饭会务组也应提供，以利参会者相互有更多的交流、互动的时间。国外就有一些学术会议，没有大会报告，把大家组织在远离城市的某度假村，让大家在每天的日常活动中相互交流和启发。; o3 I, X& v: y' Z8 z; k+ ~6 O/ J1 W$ d

scienese

20110604
; N6 ^+ B- g# t金颖老师讲课总结8 _7 J' w3 ]& c' y& e6 E
Stem cell 定义：self-renew 、differenation1 u0 E) _: I- J2 v2 W
八细胞之前叫全能干细胞（totipotent），之囊胚叫亚全能干细胞（pluripotent），再往下叫多能干细胞（multipotent）如造血干细胞和单能干细胞（unipotent）如皮肤干细胞。; a+ X2 P' h. K! x3 I# K, h( t! y
$ M% H, t( T! p9 x+ U) F0 ?6 X
在胚胎着床以前叫胚胎干细胞（embryonic stem cell）在着床以后叫epiblast。- }! x  g3 O# }# C

+ M$ r5 _. k. v# {( y- X: n5 h+ v分离胚胎干细胞有两种方法：免疫外科法，机械法  机械法难度高耗时耗力但金颖老师实验室使用此方法，免疫外科法 要掌握好补体配体的浓度以及作用时间
2 x  G+ q: b5 ^7 h2 Z( Z1 T: m! e; I; N, Z
分离胚胎干细胞最重要的一条是要找到优质的胚胎，周围滋养层细胞呈半月形时最好，将内细胞团剥离后放置于滋养层上7-9天后看有没有clone长起来，如果没有可以延长观察时间至两周，把内细胞团放置于饲养层上前两至三天不能看（place ICM on to feeder layer）防止内细胞团漂浮或与feeder 贴不紧。! P. C% ~. I9 c4 c

# K1 N3 j# e+ a! S; M* E# m维持胚胎干细胞多能性的三大关键因素：a饲养层细胞，饲养层细胞密度很重要 有的胚胎干细胞系喜欢密的有的则喜欢较稀的    b  bFGF 最佳浓度为4-8mg/ml   c传代 胶原酶 胰酶 机械法 金老师提倡用机械法 因为胰酶处理后对细胞伤害特别大 很容易就分化 胶原酶也不提倡 金老师实验室的学生传一个6cm 需要两个30min 特别辛苦9 ^, a/ B0 U$ ^1 D8 E, p
% B  O) V5 e; Z- J5 |9 R8 X3 R  W
细胞分化研究包括三个方面:1,形成拟胚体（EB）拟胚体内就有三胚层细胞  2，co-culture with other      3，monolayer culture with defined medium
% V% E; I3 {" u8 A  ~2 S3 l' y" B: X# v6 E
鉴定胚胎干细胞工作
# I# ?9 j! T% L6 a; B核型正常 - n+ |' x% @- ~5 i9 [& [$ N
能传超过70代次9 E  i7 `9 U$ @! v$ h
能冻存和解冻  人胚胎干细胞不能消化成单个细胞保存 单个细胞特别容易死 每解冻一次都像从新分离一次( h$ z+ a5 v) f5 b: W
自我更新3 D6 N/ [- [) w! G, o
表面标记检测，包括 Real-time、免疫荧光、基因表达谱分析
" D8 n5 q1 T$ X端粒酶活性. |& G% D  A  U
畸胎瘤
% ?# y: m0 A+ Z+ F8 z嵌合体动物7 w; O5 a  o3 o: V, v/ P
6 m, @0 ?# p* h1 t. M1 j2 ^
康九红老师主要讲了Chip技术 利用转录因子chip-seq和核小体分辨率chip-seq 一般能将发挥某一功能的转录因子缩小至3-5个转录因子9 |! P! A# i2 G
: e2 _  K) \+ m* m; V! I* A4 V
还讲到甲基转移酶 不同的甲基转移酶参与不同的甲基化反应  有的甲基化有利于胚胎干细胞分化，有些甲基化则能使成体细胞重编程9 C+ a* q6 v6 x1 f6 A
: [4 i  k* `" `# }( Z
下午5 i5 n6 U, Z9 q2 m9 L0 l9 q
  Y* P& G) N! X
周琪老师讲干细胞的多能性和安全性9 S9 _6 I' d4 r( K
周琪研究组还在尝试做猪的胚胎干细胞$ v  t  H, d3 n( `: d! l  |/ l

" _+ n+ h2 ?7 S9 S* b# [4 ^: Q        Oct-4        SSEA-1        SSEA-3        SSEA-4        TRA-1-40        TRA-1-819 L9 J7 y7 p7 ^, j5 J
Mouse
& B& \7 ~6 ~9 a2 K. S& bESCs         +        +        —        —        —        —
' L7 w, T9 }. C+ i0 ~0 u% m  URabbit- s- D6 T# C5 R/ C
  ESCs        +        +        +        +        +        +
; I4 v5 z& l" v5 tMonkey* R( h$ P/ E% u% A
   ESCs        +        —        +        +        +        +; A- c2 k! Z4 j( I, t
Human
' p5 I! a2 b9 z( c1 c" p  ESCs        +        —        +        +        +        +
" S! D! Z: E. q% }4 I
2 S! |, k& r* J% T. {$ S# }( R* o$ k0 x5 r5 }4 P2 I; o
赵春华老师
: W8 {; ~: Z8 G4 `% W* p" n9 M1 y9 U. i9 o0 Q) t7 W
DKK 抑制wnt 通路beta-actin  是通过激活nanog 来对beta-actin发挥作用 已发表 可查
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xiaogao

回复 username 的帖子4 v! W0 q' v: u" ]* E0 p
# F5 N9 M: q3 r& [
    4月份在杭州的那个干细胞会议，肖磊老师也讲了他实验室建的系，但是没有说可以提供，好吧，有机会问题要一些来

xiaogao

回复 scienese 的帖子2 B- J/ y; I7 n/ P
1 o6 m, S0 q* X  |, Q& U) A+ X* k
     本来对康九红老师的表观研究挺有兴趣的，但是他好像只是讲了一下ChIP-seq技术我们知道的东西和实验的细节，没有对我起到启发作用