紧急求助：饲养层处理与干细胞传代

Jwian

干细胞生长良好，急于传代，但是饲养层不幸污染全军覆没！2 J/ U7 t) L. f* ~
请问：) L$ M( Z1 u( [' ^
1、干细胞空传于没有饲养层的小皿中，行不行？$ a6 _7 M* a9 k7 g$ z. p/ x
2、我们急性丝裂霉素C处理了一皿饲养层，请问当日能否将干细胞传至皿中？因为看到很多文献都说要培养24h再用。) z7 \6 M7 I0 I# q0 R4 H; t

) F7 e: s% {; W" A, E请大家帮忙！; [! L# L( k) m, Y$ u& S. n
在线等！
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谢谢！！！

subenjinwo

问题一：我认为可以，首先我们要分析加入丝裂霉素C处理的MEF的作用是什么？个人认为有三大作用：1.可以产生营养因子，是干细胞生长得更好；2.提供LIF，使干细胞保持未分化活性；3.MEF提供了细胞的间隙，环境与整体跟更为相似。为了防止作用2，可以加入LIF，另外的两点缺少了，可能会使细胞生长状态稍差一些。但本人也看到有文献是使用包被明胶即接种干细胞的。因此，不必太担心它的可行性，只要能保证细胞不分化的前提下，让其生存下来，然后尽快的制备MEF,这才是上策。另外细胞多的话，可以冻存几管，这样就万无一失了。O(∩_∩)O~

subenjinwo

问题二：让MEF等待24h，可能是要细胞处于一种稳定的状态，另外可能是24h之后细胞分泌一些营养因子等物质积累达到一定的量了（我认为物质分泌应该不是从24h才开始的），在这两个的基础上，接种干细胞会更容易生长，状态会好一些。结合你的情况，你要看一下干细胞是不是到了非要传代的地步，如果不到，我建议等等。反正时间在等24h又不是很长，你可以先把培养液换换，24h之后再接种。

Jwian

非常谢谢！
& @8 ^3 c' O+ q* o( t/ t因为的确到了不得不传的地步，所以我传了两皿——一个空皿，加足量的LIF；一个处理后不到24h的饲养层。空皿的干细胞克隆团明显小，且外周不圆润。有饲养层的，细胞情况好些，表现为克隆团大，且边缘比较圆钝。
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POPOLD

可行

sdjjfangfang

恩，ES是可以在feeder free上养的呀，但是下面要铺Matrigel胶哦，而且如果有条件的话就用stem cell公司的mTESR培养基，如果条件不允许就收条件培养基用，但是要接待把bFGF的量补齐哦。还有，Matrigel胶要提前铺哦，要么4度过夜要么37度2小时。