求救，转染的问题

always_wp

回复 wwy551 的帖子5 m3 h& z( i- l9 s6 E3 t) h  H

. p6 W  ~9 o0 {- P5 B& C好的，谢谢！如果再遇到问题再向你请教了~

pla269

你是想稳转还是瞬转？我现在做慢病毒，转染方式不同方法和效率都不同啊

always_wp

回复 pla269 的帖子
. S* ^1 ~  B& q1 [2 V9 X, E, [  Y% `+ O# u/ s
你好 ，我是想做稳定转染的，转进去目的基因后想进行移植。能不能说说你的方法呢，谢谢啦

always_wp

回复 sdjjfangfang 的帖子8 M7 b3 P. o5 |8 y' d
, P* N! Q9 p; q0 W) ^7 X: B
哦，那我的ES是在MEF上养的，我看到有说用时间差贴壁法去除，请问一下 你们的feeder在转染前是怎么去除的

always_wp

回复 wwy551 的帖子2 O, q; p8 Y, v  \3 u. P9 {; m# B5 W

( [8 g$ U% P0 _' `0 `4 h你好，我再想麻烦问一下，就是转的时候用病毒孵育，90min，这里面的ES 还带着消化下来的feeder么，还用不用现将feeder去除呢？谢谢啦

pla269

稳转，一般都用病毒，我做的是慢病毒，感染效率高，免疫原性低，做好包装质粒mdlg、rsv/rev、vsvg，再加上你的目的基因，参照invitrogen公司的方案用lip2000和opti-mem感染293细胞，收3次48小时以内的病毒，然后就可以用病毒上清感染你的目的细胞了，感染效果不好的话，就把病毒浓缩一下

wwy551

回复 always_wp 的帖子0 v9 V0 d5 m( d6 C- _

% W& f- U: ]4 K$ P" }( Z' C这个影响不大，因为之前悬浮转染，完了还要在把ES转到FEEDER上去过夜感染。传代的时候ES本来就是连着FEEDER一起传代，传几代估计就更没什么影响了。

always_wp

回复 wwy551 的帖子; U7 d& q  h& i- t2 Z, E+ T
8 F' W: Y" }6 `' A7 f1 |
恩，明白啦 3Q

sdjjfangfang

回复 always_wp 的帖子
. _7 h+ Q5 J. M0 P* u* _" Q/ D2 S5 t: C9 U- J" `- K7 ]' M
把ESZ转到在Matrigle 上培养呀，之前可以考虑用沉降或者是低速离心的方法去除MEF

always_wp

回复 pla269 的帖子
# d- {/ U4 A! e' i* y
4 A* @: W9 T5 c% w9 `! A你好，我还想问一下，如果要是用G418筛选，那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。
' x9 b5 w1 c: b* u谢谢啊# l9 F9 b: Y7 }