PCR中最佳退火温度

langziforever

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对于一般的引物，我们以前55~60度之间基本都差不多，但有些引物可能也需要更高的温度，你开始时可以在较大的范围内摸索一下，比如50~65度，然后保证能P出来的前提下，再设较细的温度！具体多少度，你自己看啦！

pla269

回复 langziforever 的帖子' N% S+ ?% V6 b

" F/ g) X2 Q; x+ g我们的机子不能设温度梯度，我想问你一般设几度的梯度啊？

youyou315

可以把设计好的引物在这个网站上计算一下Tm值 http://www.operon.com/technical/toolkit.aspx$ u/ X% q5 p) P
一般在上下波动2度左右为最佳退火温度。

tanguixiang

我的全都是统一58度P的，没什么问题，更多的还是样品和加样的问题或者PCR的温控准确性问题

lisaruirui

引物设计时都有Tm，但是还需摸最佳退火温度，做梯度，与Tm不能差很多

懵懂干细胞

Tm值-5°，但是一般引物设计的时候会加如酶切位点，所以可以两步法！" t/ r) t% t7 Z0 `# U
当然如果引物设计的好，一步也能P出来，PCR这东西啊，运气成分也是很高的！

tonyp0720

一般低于引物合成单上的TM值1-3度，如果遇到高GC含量可以加点PCR佐剂试试，成功率会应该有所提高。

fguw

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! g, Q% B9 ]$ ]5 p# J3 ^* Z  }, F. j
我的意见是，首先用55度，如果不行再优化