往pCMV-HA等载体里连基因时是否不应包括其自身起始ATG

7ubo

如题，往这种N端标签载体连基因CDS区的时候，基因自身的起始ATG会不会导致翻译错误的从这里起始，从而使一部分表达的蛋白不携带N端标签呢？* H/ G! p$ q. d3 a0 J
我之前构建的pCMV-HA系列载体，有很大一部分表达量相当低，不知道是不是这个原因，请大家指教。

zxcv12345

回复 7ubo 的帖子: O3 a! ~, i" t0 S* M" z( w

9 a% F$ T! h: i9 |基因自身的起始ATG应不会导致错误翻译，表达量低应有其他原因，如被蛋白酶降解，有不常用的密码子等等

痞子的烟头

ATG没有关系，考虑是否有稀有密码子等；进行优化，表达量低可考虑的因素较多，如诱导条件，基因本身结构等

langziforever

ATG只会使你的基因表达产物和N端标签间多个Met而已，只要上游的ATG没有突变就不会从这里开始翻译。如楼上所收，表达量低一半我们是考虑稀有密码子的问题，另外，诱导表达的条件和细菌培养也有一定原因，可以考虑降低培养细菌温度，和优化诱导条件试一下！