求助human MSC 培养

大少爷

剥离的胶体少没关系，关键是要组织块要纯，带羊膜的话容易长出上皮细胞，而且形态和MSC很像。

liufutang

原代细胞培养开始都不要轻易去动它，等到克隆足够大了再处理。

1301918986

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$ q# [$ W! j; `) n* H
: a- Z  u, O2 e0 \4 ^我们实验室一直是用组织块发培养的，不过还好每次都成功，但是细胞量不大。而且传代后细胞形态就不好了，不知道是为什么。

lizhiyong

脐带MSC培养扩增所得的数目要比BMMSC更容易，更多。组织块太大，绝对不宜；尽量剪碎，酶消化过夜，常规种植（MEM-alpha+10%hyclone+双抗），约10天传代，很容易得到你需要的细胞的。。

liuerfu

最近做了几次MSC骨髓的，不是污染了就是细胞长不出来。4 A8 @- h6 G) q2 e+ h# {- j
吹骨髓后，方法主要有直接贴壁培养，梯度离心后培养

jxydiandian

我们实验室两种方法都试过，贴壁法成本低，爬出来的细胞比较纯，但是密度不均一，我们一般3-5天左右可以见到细胞贴壁，7-10太难就可以去组织块了，屡试不爽，方法也是像楼主说那样，只是我们羊膜也去除地比较干净，组织块剪碎一点；酶消化法我们一般是过夜，这时的组织块就不能剪太碎了，防止消化过度，这种方法细胞第2天就有贴壁的，纯度还可以，就是比较脏。

xuchao717

我认为用贴壁法养出的细胞纯度最好，成功率也最高，几乎没有失败过。! a+ U6 v# C3 l  s4 c! |5 P9 s- {
培养基：Fasgrow 无血清培养基4 u# |9 l# I  t  I
实验步骤) o( G5 y: N2 B/ E6 h

3 b' P8 l5 k8 ]1 G$ O! n+ I( ]$ u1）        新鲜脐带，用氯化钠缓冲液冲洗；所述氯化钠注射液中不含青霉素和链霉素；
5 A8 f! p4 r6 L2）        剪取6cm长脐带，将脐带剪成2cm长的小段，剥离人脐带华通氏胶（wharton jelly），用氯化钠缓冲液反复冲洗；6 Q+ t$ p& c$ f3 l( Q" `" Y& V
3）        将剥离的人脐带华通氏胶（wharton jelly）剪碎成1mm3小块；
! V$ M- q/ [* F" ^4）        将剪碎组织加入无血清培养基洗涤，在1200r/min条件下离心5分钟，弃上清；
3 U3 w2 y( y: S/ B( G( I  H5）        将组织块和培养基按体积比2.5:1比例加入培养基，混匀组织块，接种至细胞培养瓶中，置培养箱中培养；

若兰汀

2型胶原酶建议用0.1%，37度，振荡摇匀消化6小时。