关于ES细胞的全能性问题

renqing001

请教高手们，ES细胞有没有可能在传代或保存过程中，失去部分功能，也就是说最终不能发育成某种组织，譬如germline。本人在做基因打靶，使用筛选得到的阳性ES细胞克隆，能得到嵌合体，且嵌合率很高，但交配几代却无法获得杂合F1代，是否会是ES细胞的问题？或是其他什么问题？盼复！

jhu132llh

交配不能产生后代？
; |+ k/ Y8 B# }( k3 \5 I不一定就是ES有问题；6 o+ x9 f. O' g- p* h& W
应该首先分析的动物的受精能力怎么样
: I+ N( h6 C% m" S8 ~  M* F先可以采精做一下精液分析8 R9 s  }0 M/ N- _
看看精子浓度、活度、还有别的指标是否都正常；/ A' m+ v! o7 o( C1 x) l4 O! e

chliu

有可能是ES cells没有发育成生殖细胞，可以重新产生嵌合体试一下

chliu

也有可能生殖系统不正常，或者是双性体，产生后代会有问题

ice_taisy

个人理解，ES细胞注入胚胎获得嵌合体的时候是有全能性的。但是受周围环境的影响，它只会分化成部分器官。而其它器官由原来的细胞分化而来。这个时候细胞就已经分化了，不是ES细胞也没有全能性了。如果在这个时候阳性克隆细胞没有分化成生殖细胞系。那之后就不会有阳性克隆的生殖细胞了。自然不可能生出杂合体小鼠了。所以这应该是一个概率问题，就看你的细胞嵌合在哪里了。当然，也可能和你细胞注入部位以及时间有关。可以多参考下文献啊。

ice_taisy

你也不用交配几代。嵌合体交配之后的第一代要么就是杂合体。要么就完全是正常小鼠。所以子一代不是杂合子它就已经完全失掉阳性克隆的特性了，没必要再交配了。

renqing001

回复 ice_taisy 的帖子. l  J8 y  `- h* |0 C( T

8 `# e' J: n0 m! _, K* ~你好！请问嵌合体交配后第一代就一定出杂合体，这是你的经验得出的，还是有出处？我的老板在国外做的时候说有时候会交配几代后才出1，2只的情况！

renqing001

回复 chliu 的帖子! Q. E/ V' j1 }4 ]* r: x
; F- f/ P. V; @
你的意思是不是得到的嵌合体本身的生殖系统不正常，才会这样产生不出杂合F1代？但是它也能像正常的小鼠一样产生后代，而且后代都很正常！

chliu

回复 renqing001 的帖子
- ]9 L) o/ L' J, V8 T: I4 r5 x. c  H* m$ c
那就是嵌合体的生殖系统是正常的，ES cells没有分化为生殖细胞。

chliu

回复 renqing001 的帖子4 |" T! @( b3 N( n: {3 r1 R) D

" s8 A+ U) @8 Y* a) W2 }不一定嵌合体交配以后第一代没有杂合体，以后就一定不会产生杂合体，但是以后产生杂合体的几率是比较小的。建议重新注射产生嵌合体，并且建议用不同的ES cells克隆去注射，不要只把希望寄托在这个嵌合体以后产生杂合体上。