求助：脂质体2000转染293t包装细胞制备逆转录病毒

如冰

各位高手，脂质体2000加进去后，293t出现大量悬浮死亡，怎么办呢？培养293t有什么技巧吗？什么样的条件才可以把它调整到最好？多谢！！

linlicau

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' L7 D: w8 @  v( k0 L1 i. Y别加太多，6well板每个板加4-8微升足够了，细胞死一些也没关系，本来lipo对于细胞是由一定毒性的，只要你最后收的细胞够用就行。1 c1 ?. ^% ~0 {+ s4 V9 y

6 T0 A; [7 a4 O3 t( x我用293FT，长得都很好的，也很好养，比干细胞容易多了，几乎不需要操心。

如冰

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谢谢您的建议！您每次铺293FT的细胞量是多少啊？就是铺多少第二天才可以长到80%左右的融合呢?293FT与293T的区别，您可以再细说一下吗？非常感谢！

linlicau

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293FT就是fast的293T，一般1:3传代，就可以很容易的长到80%

lili_19840516

那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度，我觉得你脂质体可能加的优点多，按照说明书上推荐的浓度做个优化实验

amosummer

一般长到60-80%汇合度就可以转染了，如果脂质体转染伤害太大，你可以尝试其他的转染方法，进行对比，比如磷酸钙转染法！

linlicau

lili_19840516 发表于 2011-7-13 13:04 # R& |9 }/ Q* N6 {" ?3 H! C" L
那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度，我觉得你脂质体可能加的优点多，按照说明书 ...

* r4 {, I# B7 z" I2 y7 U
估计可能细胞不同，加的量也有区别吧。; N7 F, w" {1 _5 o9 f& v

* M8 w1 W/ u+ E0 y: q我们实验室用293FT，就是按照我上面说的那个量加的。一直都是这么做。6well做western，12well做qPCR.

如冰

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" f5 `6 P' Z& x% A' E1 [+ c; k, `) {5 l
非常感谢您的回复，您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗？效果怎么样啊？是不是这个细胞用于包慢病毒的比较多啊？

linlicau

如冰 发表于 2011-7-14 08:53 5 S4 q1 S& k6 K7 E" l) z( e
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8 |) ~2 N' V' F+ y! g$ }7 o+ t5 b6 h
: e6 v% L: [; L, L非常感谢您的回复，您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗？效果怎么样啊？是不是这个 ...

# C' e5 h6 T6 q+ L# U
我们实验室使用慢病毒（Lentivirus），加油！

如冰

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7 g, |! T, V5 ]% q1 E1 b+ q谢谢的帮助，我会加油的！希望您以后多多帮助！非常感谢