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求助:脂质体2000转染293t包装细胞制备逆转录病毒 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-7-13 10:39 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位高手,脂质体2000加进去后,293t出现大量悬浮死亡,怎么办呢?培养293t有什么技巧吗?什么样的条件才可以把它调整到最好?多谢!!
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沙发
发表于 2011-7-13 11:04 |只看该作者
本帖最后由 linlicau 于 2011-7-13 11:05 编辑
( p7 q; @; v& H! N2 g  z! o
# A/ @- W$ H$ B) E9 L, _回复 如冰 的帖子3 A, K) ?) f$ K8 C# _9 I
% q* g) g- a5 ^: F2 H/ n
别加太多,6well板每个板加4-8微升足够了,细胞死一些也没关系,本来lipo对于细胞是由一定毒性的,只要你最后收的细胞够用就行。
7 M9 b+ j0 n3 r
# T4 Y( g, W( w9 z; m  l我用293FT,长得都很好的,也很好养,比干细胞容易多了,几乎不需要操心。
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藤椅
发表于 2011-7-13 11:16 |只看该作者
回复 linlicau 的帖子
( \# R" E9 E8 B! Z7 {6 y9 d( N) u2 M  n8 q5 X
谢谢您的建议!您每次铺293FT的细胞量是多少啊?就是铺多少第二天才可以长到80%左右的融合呢?293FT与293T的区别,您可以再细说一下吗?非常感谢!
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板凳
发表于 2011-7-13 12:26 |只看该作者
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回复 如冰 的帖子4 g* M, D4 z) O1 O5 T& K3 _+ H

% q# L. R- x: L' Z293FT就是fast的293T,一般1:3传代,就可以很容易的长到80%
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报纸
发表于 2011-7-13 13:04 |只看该作者
那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度,我觉得你脂质体可能加的优点多,按照说明书上推荐的浓度做个优化实验
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发表于 2011-7-13 14:42 |只看该作者
一般长到60-80%汇合度就可以转染了,如果脂质体转染伤害太大,你可以尝试其他的转染方法,进行对比,比如磷酸钙转染法!
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发表于 2011-7-14 08:37 |只看该作者
lili_19840516 发表于 2011-7-13 13:04 % m' K$ l/ q6 p- y+ [' A
那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度,我觉得你脂质体可能加的优点多,按照说明书 ...

* R  V7 ^; _/ s, ?. T% _* i6 I1 @8 i估计可能细胞不同,加的量也有区别吧。" X1 d  P; s0 T: j. A7 c2 W$ G
, u6 Y# O; {; ^  G, T9 Y, J7 t
我们实验室用293FT,就是按照我上面说的那个量加的。一直都是这么做。6well做western,12well做qPCR.
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发表于 2011-7-14 08:53 |只看该作者
回复 linlicau 的帖子
9 V) U! _5 D# E- I+ C
$ e8 _% h9 m( H! c/ y非常感谢您的回复,您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗?效果怎么样啊?是不是这个细胞用于包慢病毒的比较多啊?

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发表于 2011-7-14 10:30 |只看该作者
如冰 发表于 2011-7-14 08:53
2 }6 S! Z9 Z- P0 j, l0 O回复 linlicau 的帖子
; N( j% ^# d+ D7 |) [: n
6 l+ ~0 n: P1 {) G8 d; }非常感谢您的回复,您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗?效果怎么样啊?是不是这个 ...
- V+ b: c$ r" \
我们实验室使用慢病毒(Lentivirus),加油!
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发表于 2011-7-14 21:43 |只看该作者
回复 linlicau 的帖子% i- G1 o' [; [) r7 ]" P4 \8 d: Q
# J& l/ {$ q! n7 ?
谢谢的帮助,我会加油的!希望您以后多多帮助!非常感谢
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