求助：脂质体2000转染293t包装细胞制备逆转录病毒

如冰

各位高手，脂质体2000加进去后，293t出现大量悬浮死亡，怎么办呢？培养293t有什么技巧吗？什么样的条件才可以把它调整到最好？多谢！！

linlicau

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# A/ @- W$ H$ B) E9 L, _回复 如冰 的帖子3 A, K) ?) f$ K8 C# _9 I
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别加太多，6well板每个板加4-8微升足够了，细胞死一些也没关系，本来lipo对于细胞是由一定毒性的，只要你最后收的细胞够用就行。
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# T4 Y( g, W( w9 z; m  l我用293FT，长得都很好的，也很好养，比干细胞容易多了，几乎不需要操心。

如冰

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谢谢您的建议！您每次铺293FT的细胞量是多少啊？就是铺多少第二天才可以长到80%左右的融合呢?293FT与293T的区别，您可以再细说一下吗？非常感谢！

linlicau

回复 如冰 的帖子4 g* M, D4 z) O1 O5 T& K3 _+ H

% q# L. R- x: L' Z293FT就是fast的293T，一般1:3传代，就可以很容易的长到80%

lili_19840516

那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度，我觉得你脂质体可能加的优点多，按照说明书上推荐的浓度做个优化实验

amosummer

一般长到60-80%汇合度就可以转染了，如果脂质体转染伤害太大，你可以尝试其他的转染方法，进行对比，比如磷酸钙转染法！

linlicau

lili_19840516 发表于 2011-7-13 13:04 % m' K$ l/ q6 p- y+ [' A
那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度，我觉得你脂质体可能加的优点多，按照说明书 ...

* R  V7 ^; _/ s, ?. T% _* i6 I1 @8 i估计可能细胞不同，加的量也有区别吧。" X1 d  P; s0 T: j. A7 c2 W$ G
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我们实验室用293FT，就是按照我上面说的那个量加的。一直都是这么做。6well做western，12well做qPCR.

如冰

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9 V) U! _5 D# E- I+ C
$ e8 _% h9 m( H! c/ y非常感谢您的回复，您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗？效果怎么样啊？是不是这个细胞用于包慢病毒的比较多啊？

linlicau

如冰 发表于 2011-7-14 08:53
2 }6 S! Z9 Z- P0 j, l0 O回复 linlicau 的帖子
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6 l+ ~0 n: P1 {) G8 d; }非常感谢您的回复，您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗？效果怎么样啊？是不是这个 ...

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我们实验室使用慢病毒（Lentivirus），加油！

如冰

回复 linlicau 的帖子% i- G1 o' [; [) r7 ]" P4 \8 d: Q
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谢谢的帮助，我会加油的！希望您以后多多帮助！非常感谢