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求助:脂质体2000转染293t包装细胞制备逆转录病毒 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-7-13 10:39 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位高手,脂质体2000加进去后,293t出现大量悬浮死亡,怎么办呢?培养293t有什么技巧吗?什么样的条件才可以把它调整到最好?多谢!!
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沙发
发表于 2011-7-13 11:04 |只看该作者
本帖最后由 linlicau 于 2011-7-13 11:05 编辑
! t# X8 x5 a% t' Q8 Z; v- Y% h
回复 如冰 的帖子! e9 ~* @( m( I; H7 Z# \- Q) L
/ i. X" G/ G) V8 K
别加太多,6well板每个板加4-8微升足够了,细胞死一些也没关系,本来lipo对于细胞是由一定毒性的,只要你最后收的细胞够用就行。' p0 _- M9 `$ X- g1 |: [
+ O9 F1 I8 n# H) X
我用293FT,长得都很好的,也很好养,比干细胞容易多了,几乎不需要操心。
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藤椅
发表于 2011-7-13 11:16 |只看该作者
回复 linlicau 的帖子- r2 E; G. ]- W
; ^0 I8 k0 K# ^- D/ T8 @* k7 e
谢谢您的建议!您每次铺293FT的细胞量是多少啊?就是铺多少第二天才可以长到80%左右的融合呢?293FT与293T的区别,您可以再细说一下吗?非常感谢!
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板凳
发表于 2011-7-13 12:26 |只看该作者
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回复 如冰 的帖子
2 D- Q7 S' {. d: _4 B" a4 P5 K. r& d3 I& [' n- v
293FT就是fast的293T,一般1:3传代,就可以很容易的长到80%
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报纸
发表于 2011-7-13 13:04 |只看该作者
那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度,我觉得你脂质体可能加的优点多,按照说明书上推荐的浓度做个优化实验
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地板
发表于 2011-7-13 14:42 |只看该作者
一般长到60-80%汇合度就可以转染了,如果脂质体转染伤害太大,你可以尝试其他的转染方法,进行对比,比如磷酸钙转染法!
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发表于 2011-7-14 08:37 |只看该作者
lili_19840516 发表于 2011-7-13 13:04 0 m, H3 t- U- h4 `& @& `9 r
那个脂质体2000的说明书上应该有推荐的细胞密度和脂质体的浓度,我觉得你脂质体可能加的优点多,按照说明书 ...

" ]( Z8 c! |9 H. K; T8 L0 v! @估计可能细胞不同,加的量也有区别吧。
% ?; y. p. S2 }2 B9 G9 \, N$ U; [8 O1 g5 m% i6 B
我们实验室用293FT,就是按照我上面说的那个量加的。一直都是这么做。6well做western,12well做qPCR.
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发表于 2011-7-14 08:53 |只看该作者
回复 linlicau 的帖子& U- d, g1 h1 r; i

: P. C# s( S3 B1 ]非常感谢您的回复,您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗?效果怎么样啊?是不是这个细胞用于包慢病毒的比较多啊?

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发表于 2011-7-14 10:30 |只看该作者
如冰 发表于 2011-7-14 08:53
2 E" J3 ^" i) H; g回复 linlicau 的帖子
9 t: \4 M1 Q7 l% f
+ {, J9 v# c7 g& M非常感谢您的回复,您实验室里用293FT包装过逆转录病毒吗?效果怎么样啊?是不是这个 ...
# v2 t$ q9 @  Y$ ]6 S
我们实验室使用慢病毒(Lentivirus),加油!
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发表于 2011-7-14 21:43 |只看该作者
回复 linlicau 的帖子8 F5 S9 d4 u! h& f& u4 ~! }2 U

/ A% B( b7 L% Y& M( m$ _谢谢的帮助,我会加油的!希望您以后多多帮助!非常感谢
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