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wxyWXY

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楼主

发表于 2011-7-19 17:09 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我前几天用组织块贴壁法想分离成年小鼠的成纤维细胞现在已经4天了但还没有细胞爬出来我用的是7周龄的小鼠（我的分离方法：刮毛用p/s洗过后用剪刀剪成小块放在培养皿中加少量的培养液）

请问大家有人做过吗有具体的步骤吗谢谢了

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zerollx

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沙发

发表于 2011-7-19 22:24 |只看该作者

回复 wxyWXY 的帖子
; s, W5 R- t8 a
你应该附上你更为具体的操作步骤，细节决定成败，否则别人也不会知道你的问题出在哪。

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hygene

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藤椅

发表于 2011-7-20 12:42 |只看该作者

成年小鼠皮肤成纤维细胞可从尾部取材用组织块培养法进行原代培养·添加血清的
M199(Earle，s)和低糖的DMEM 均能较好的满足原代细胞的生长．两种培养液中细胞增殖的: ?; k, W0 P2 y8 [+ z" \ \. n- H- K
速度无明显差异．用0．25 胰蛋白酶消化小鼠尾尖原代培养物．上皮细胞与成纤维细胞有明
显的敏感度差别．经控温控时消化传代，可将上皮细胞与成纤维细胞分离纯化．

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wxyWXY

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板凳

发表于 2011-7-21 00:19 |只看该作者

谢谢拉

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kastanie

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报纸

发表于 2011-7-22 16:14 |只看该作者

取过人皮肤成纤维细胞，采用的也是剪成小块后加培养基培养的方法。0 m _! x% h& q, o
* a# H. ]# v) B" H- |! B! }
我觉得很关键的一步是要让皮肤块在培养皿中贴壁，不能一直飘在培养基中，在最初的几天不要一直观察，以免动了培养皿导致皮肤块飘起来，只有贴在培养皿壁上，细胞才能爬出来开始生长增殖。