与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性

deron

主题：与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性. O+ u. b( X& B

( V- w, z$ s$ Z% j) u/ t1 \" `. n6 R% t. o说明：原文来自haematologica，干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）4 T+ J. q' S7 Z- U4 |( \

( _# K9 P' r* R翻译内容：
$ T- x' L8 {+ F' h, z% P很多学者报道多发性骨髓瘤（MM）特异性抗原致敏的树突状细胞（DC）在体内外应用的研究，这种DC细胞用以对MM进行免疫治疗。数据显示包括T细胞在内，整个固有免疫系统均对MM有毒性反应。这里，我们检测了细胞因子诱导杀伤性（CIK）细胞对骨髓瘤细胞的细胞毒作用。这种多克隆效应群体包含T细胞、NK细胞和NKT细胞。" I" `2 h; K: c1 e5 j: U
设计和方法8 N- N1 ?' `1 L0 T
从MM病人白细胞层或血液中培养出的CIK细胞，与自体基因型致敏的DC细胞共培养。乳酸脱氢酶释放试验检测细胞毒作用。  _& J/ g0 }& N0 ~" F8 E! a
结果
% v+ u0 d7 P3 _8 ~0 MCIK细胞能够以低的效应/靶细胞比率溶解MM细胞。在与特异性致敏DC细胞共培养后，上述效应明显增强（83.8%的溶解率，效应/靶细胞比为16：1）。用干扰素γ分泌型磁珠分选后，CIK细胞以较低的效应/靶细胞比（5：1）达到最高的细胞毒作用。在完全自体环境中富集一位MM患者的CD138+细胞后，CIK细胞也呈现出高细胞杀伤活性（54.4%溶解率，效应/靶细胞比为6：1）。有趣的是，(CIK)没有针对骨髓CD138-片段的细胞杀伤活性。
8 A1 ~$ t' g3 x7 F( n) Q说明和结论
- q* e) ^' w* Y% f9 D6 h' L用效应细胞的混杂群体组分，我们能够激活固有和适应性免疫系统对抗骨髓瘤细胞。CIK细胞对MM细胞表现出高溶解活性，且这种活性在（CIK）与抗原特异性致敏DC细胞共培养后，能够得到加强。6 M* S/ d( _( N+ D; W

' f' J, H8 {, H1 Z4 k原文：   

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关于DC&CIK培养的protocol，这篇也算是很经典的了0 g; ^6 @, o( z+ ^3 Q# e

7 @" u5 \6 |! W% `DC培养
' F0 O4 g% B% c5 d用ficoll密度梯度离心法，从健康供者或从MM患者血液中分离出外周血淋巴细胞。血液抽取遵循当地伦理委员会方案标准。细胞以5×106/ml的密度，在含10%自体热灭活血清的1640液中，六孔板中贴附1小时。未贴壁细胞收集用以培养CIK细胞。贴壁细胞在2ml/孔的培养基中培养，培养基成分为10%自体热灭活血清、750U/ml粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和500U/ml白介素4。
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. T- e0 P* s; v6 ^2 a. P! |CIK细胞培养
; g, [9 x; d7 y" l  q! z2 s6 d6 A" v0天        ，干扰素γ1000U/ml。
' S' k3 R- A& ?0 t' s, |0 e8 O24h孵育后，50ng/ml抗CD3，100U/ml白介素1，300U/ml白介素2。+ U! M8 B/ [/ H& [9 ^$ i( |9 S. p
细胞在37℃、5%二氧化碳环境中培养，每3天以3×106/ml的密度补充新鲜培养基和IL-2。
: o- |; ^' v" y% W5 `1 A完全培养基组分：10%FBS、25mM Hepes、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。* z; K* ?' t' R# d" @
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研究者也在结果中观察到CIK细胞可以以低效应/靶细胞比率杀伤MM细胞，在与致敏DC共培养后可以明显增强这种杀伤效应