与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性

deron

主题：与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性8 k# I5 p+ m1 [9 E7 I+ X
# i) e" \0 J* K- [" @+ U( _/ h1 E
说明：原文来自haematologica，干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）1 o( M! f* T# |6 d. x- f4 U+ S

: y1 ~8 {; a8 {翻译内容：: I. q: e/ B8 t3 d) m
很多学者报道多发性骨髓瘤（MM）特异性抗原致敏的树突状细胞（DC）在体内外应用的研究，这种DC细胞用以对MM进行免疫治疗。数据显示包括T细胞在内，整个固有免疫系统均对MM有毒性反应。这里，我们检测了细胞因子诱导杀伤性（CIK）细胞对骨髓瘤细胞的细胞毒作用。这种多克隆效应群体包含T细胞、NK细胞和NKT细胞。$ g, A. P% G6 ^& m6 @
设计和方法9 ~+ t  L" W' _! ]! S/ i& B
从MM病人白细胞层或血液中培养出的CIK细胞，与自体基因型致敏的DC细胞共培养。乳酸脱氢酶释放试验检测细胞毒作用。1 W1 V* J$ t* a  d, g
结果( E1 S5 Q6 t$ ?9 D! Y
CIK细胞能够以低的效应/靶细胞比率溶解MM细胞。在与特异性致敏DC细胞共培养后，上述效应明显增强（83.8%的溶解率，效应/靶细胞比为16：1）。用干扰素γ分泌型磁珠分选后，CIK细胞以较低的效应/靶细胞比（5：1）达到最高的细胞毒作用。在完全自体环境中富集一位MM患者的CD138+细胞后，CIK细胞也呈现出高细胞杀伤活性（54.4%溶解率，效应/靶细胞比为6：1）。有趣的是，(CIK)没有针对骨髓CD138-片段的细胞杀伤活性。
$ b+ ~4 i+ K5 d2 Z# q$ H0 `说明和结论
  _+ F/ w9 d  x3 d1 m, N% g用效应细胞的混杂群体组分，我们能够激活固有和适应性免疫系统对抗骨髓瘤细胞。CIK细胞对MM细胞表现出高溶解活性，且这种活性在（CIK）与抗原特异性致敏DC细胞共培养后，能够得到加强。
3 ~9 L* p$ ^; R& r. J* z' A- O: W+ s  ?% C  Q6 r
原文：   

deron

关于DC&CIK培养的protocol，这篇也算是很经典的了- H+ D$ l4 k- s" Q* P1 u4 Y# v

- ?, n( S; Z/ ?: n% R7 w7 ^' Z  h& SDC培养4 N) A6 ?3 S$ F% f
用ficoll密度梯度离心法，从健康供者或从MM患者血液中分离出外周血淋巴细胞。血液抽取遵循当地伦理委员会方案标准。细胞以5×106/ml的密度，在含10%自体热灭活血清的1640液中，六孔板中贴附1小时。未贴壁细胞收集用以培养CIK细胞。贴壁细胞在2ml/孔的培养基中培养，培养基成分为10%自体热灭活血清、750U/ml粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和500U/ml白介素4。
0 W  t- J" [4 R9 q  n$ g2 ?$ ]0 N! J- E8 w, a* O* V/ z
CIK细胞培养! T, B; g6 V. _' W/ K# D: n
0天        ，干扰素γ1000U/ml。( i7 `, u" [+ ], T5 K
24h孵育后，50ng/ml抗CD3，100U/ml白介素1，300U/ml白介素2。$ E6 ?2 o- d: J5 l2 D  z% X4 ~: |
细胞在37℃、5%二氧化碳环境中培养，每3天以3×106/ml的密度补充新鲜培养基和IL-2。
/ @! z4 P* N( R9 c完全培养基组分：10%FBS、25mM Hepes、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。
$ i; J8 O. S/ D( L8 P% ?) v
0 K* ~' a( [" `+ G% |+ D2 H# N研究者也在结果中观察到CIK细胞可以以低效应/靶细胞比率杀伤MM细胞，在与致敏DC共培养后可以明显增强这种杀伤效应