与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性

deron

主题：与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性9 M/ [9 c: e% {/ s8 h* F( }
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说明：原文来自haematologica，干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）6 `* `& ]1 G. n
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翻译内容：5 G' i1 Q/ z' f2 e! h, |( J
很多学者报道多发性骨髓瘤（MM）特异性抗原致敏的树突状细胞（DC）在体内外应用的研究，这种DC细胞用以对MM进行免疫治疗。数据显示包括T细胞在内，整个固有免疫系统均对MM有毒性反应。这里，我们检测了细胞因子诱导杀伤性（CIK）细胞对骨髓瘤细胞的细胞毒作用。这种多克隆效应群体包含T细胞、NK细胞和NKT细胞。0 c) P; Y, E( Q$ \* s7 ]
设计和方法0 `' A# `6 b1 `! t+ e
从MM病人白细胞层或血液中培养出的CIK细胞，与自体基因型致敏的DC细胞共培养。乳酸脱氢酶释放试验检测细胞毒作用。
% h. L7 P5 {* W) {结果
$ _4 s/ F8 J# u) c3 J7 {CIK细胞能够以低的效应/靶细胞比率溶解MM细胞。在与特异性致敏DC细胞共培养后，上述效应明显增强（83.8%的溶解率，效应/靶细胞比为16：1）。用干扰素γ分泌型磁珠分选后，CIK细胞以较低的效应/靶细胞比（5：1）达到最高的细胞毒作用。在完全自体环境中富集一位MM患者的CD138+细胞后，CIK细胞也呈现出高细胞杀伤活性（54.4%溶解率，效应/靶细胞比为6：1）。有趣的是，(CIK)没有针对骨髓CD138-片段的细胞杀伤活性。
" N4 d8 W; t% o- W% ~说明和结论
% G; Y7 q5 ]. {8 X' v  C用效应细胞的混杂群体组分，我们能够激活固有和适应性免疫系统对抗骨髓瘤细胞。CIK细胞对MM细胞表现出高溶解活性，且这种活性在（CIK）与抗原特异性致敏DC细胞共培养后，能够得到加强。  u1 w# p* }, Q3 U: U" j

( l! Z9 x0 R, ^, I- A原文：   

deron

关于DC&CIK培养的protocol，这篇也算是很经典的了
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DC培养' W' ~2 l' G, V& [3 E& ^/ P
用ficoll密度梯度离心法，从健康供者或从MM患者血液中分离出外周血淋巴细胞。血液抽取遵循当地伦理委员会方案标准。细胞以5×106/ml的密度，在含10%自体热灭活血清的1640液中，六孔板中贴附1小时。未贴壁细胞收集用以培养CIK细胞。贴壁细胞在2ml/孔的培养基中培养，培养基成分为10%自体热灭活血清、750U/ml粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和500U/ml白介素4。
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CIK细胞培养
* q5 }: `/ m0 C! \+ O0天        ，干扰素γ1000U/ml。! w* o5 M* _+ y% l: k
24h孵育后，50ng/ml抗CD3，100U/ml白介素1，300U/ml白介素2。* n9 Y& m. N* {1 |, W
细胞在37℃、5%二氧化碳环境中培养，每3天以3×106/ml的密度补充新鲜培养基和IL-2。6 ~4 O! s7 {. [' y4 |7 |; T3 ], q
完全培养基组分：10%FBS、25mM Hepes、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。
  C+ d, x* p& H# n
/ ~; ^$ o4 y$ j, z' S研究者也在结果中观察到CIK细胞可以以低效应/靶细胞比率杀伤MM细胞，在与致敏DC共培养后可以明显增强这种杀伤效应