支原体检测

牙牙丫丫123

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1 X1 ?7 K; j0 a# x( d* I8 [) z6 t8 }7 G& k; C+ x- P: `: N
我们用的只是普通的PCR，可是每次结果都不稳定……, L8 P7 L& ?8 i# O+ i

youtellme

建立个人认为:" ~; ]6 w) a4 b: ~4 u1 z5 G
1现在有专门检测支原体的试剂盒，做个出判断还是可以的。
4 t" x* P# F, t, s4 v! M! v1 p! v' u2发现阳性了如果还想做的好点就PCR吧。方法自己选看目的了。
5 r5 X  w) g& `* F7 `3通过荧光检测。
5 k9 H9 P9 N) H) q( \. v4平时看看细胞生长状态有个大致的判断吧。

wang3033

1.一般采用PCR检测支原体即可，一般不会有假阴性，有可能会假阳性，; S1 I! p, V( ~9 e8 K
2.电镜，将细胞培养基上清离心，收集沉淀，电镜看到支原体颗粒是最可靠地，沙斯爆发时，由于洪院士电镜下看到病人肺部细胞中存在支原体，导致非典病因是病毒或支原体争论！最后由国外学者电镜看到病毒，并测序鉴定到非典病毒

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-8 14:27 , {3 N8 p/ {; \% @. {: Q
回复 wwwert 的帖子. C# @& o1 @, D4 H
# m1 t0 e9 q( P1 S8 f6 O; V3 K
能分享一下你们实验室的protocol吗？

. b6 n. m1 O& S! ?/ m! C我们用的这个引物  n) E+ R% F* _7 V( y4 _
For: 5' GGG AGC AAA CAG GAT TAG ATA CCC T 3'2 q4 z2 p2 Y& _" @5 W
Rev: 5' TGC ACC ATC TGT CAC TCT GTT AAC CTC 3' 1 ~" ^; F9 Q' ?* R
Product: 280 bp
$ {* j  O# k5 |+ t5 _9 h35个循环, ( |) d  x+ D1 Q: C/ i- d
大约50ng模板,用kit提的,比较纯/ s& E' P1 i) s8 \6 G5 Z; u
  B: @; ~/ O+ r+ F

kosmos.y

支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应（PCR）等方法。基因探针的核酸杂交法，虽然敏感性和特异性都很高，但基因探针常用同位素标记，放射性危害大，设备要求高且繁琐难以推广，近年来发展的PCR技术，使得支原体检测变得简便、快速、敏感、特异。

goodboy

回复 wwwert 的帖子1 a* I9 O3 w: c
6 w1 A9 F9 N) h$ l8 c, \! H& d6 N
你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-17 14:56
9 X& W1 r* |  q& J1 z- h* w回复 wwwert 的帖子4 K( ?3 T" i/ a
2 Z& V# U0 e6 W" u
你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

  }; O, N* I8 ^( y7 h2 i
DNA. `6 T6 ]/ i2 X- W0 Z" r
应该是扩增核糖体RNA基因的

goodboy

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# m6 [  U. ]4 }, T3 Fxie xie