支原体检测

牙牙丫丫123

回复 goodboy 的帖子9 A! c3 @) ]2 h7 x

) g" U% y; x, }  d( Q我们用的只是普通的PCR，可是每次结果都不稳定……
* S' G+ [8 r( k

youtellme

建立个人认为:
0 S# A1 v) r* t; w  @& O2 N: r1现在有专门检测支原体的试剂盒，做个出判断还是可以的。( S# V( v; H' P$ g1 m
2发现阳性了如果还想做的好点就PCR吧。方法自己选看目的了。% j( \+ s; |) C  Q4 q
3通过荧光检测。/ u0 M& C4 f# x
4平时看看细胞生长状态有个大致的判断吧。

wang3033

1.一般采用PCR检测支原体即可，一般不会有假阴性，有可能会假阳性，
% N& c! D; _2 G! o2.电镜，将细胞培养基上清离心，收集沉淀，电镜看到支原体颗粒是最可靠地，沙斯爆发时，由于洪院士电镜下看到病人肺部细胞中存在支原体，导致非典病因是病毒或支原体争论！最后由国外学者电镜看到病毒，并测序鉴定到非典病毒

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-8 14:27
5 l; @$ @* w3 F7 f2 d回复 wwwert 的帖子) @+ d$ s/ v% H% Z
! e$ E3 @" m" T" y+ I
能分享一下你们实验室的protocol吗？

1 w+ c3 k$ @# U! E* s7 E+ Z# N
我们用的这个引物
( V& Y0 U9 B) `2 s. tFor: 5' GGG AGC AAA CAG GAT TAG ATA CCC T 3'7 `$ R% Z; v% b1 O: I, c* P
Rev: 5' TGC ACC ATC TGT CAC TCT GTT AAC CTC 3' # j: m/ S3 n$ O+ k, p: h8 `
Product: 280 bp
: M+ p* w4 Y6 P( W' v35个循环, % b6 J; w" S- v7 ?! k/ u2 z5 u+ w9 D
大约50ng模板,用kit提的,比较纯+ l* S8 k5 P/ @

/ O: u0 \) T5 s& }; ~( L) \

kosmos.y

支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应（PCR）等方法。基因探针的核酸杂交法，虽然敏感性和特异性都很高，但基因探针常用同位素标记，放射性危害大，设备要求高且繁琐难以推广，近年来发展的PCR技术，使得支原体检测变得简便、快速、敏感、特异。

goodboy

回复 wwwert 的帖子: i7 m: j% @! K: J! K

1 M8 u" d0 L" O% r( ?# b7 ~你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-17 14:56
$ X7 ~/ M. \8 @% ]) @" F  k/ I5 K回复 wwwert 的帖子* r5 d0 C, d2 y8 E" u

9 e( w: m& i: `) ]7 `3 [你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

1 B# W4 K0 Q" V) }2 W) s& k$ MDNA
* S. b: Q: o. @1 ~& P8 o6 F9 @) \应该是扩增核糖体RNA基因的

goodboy

回复 wwwert 的帖子3 a  y/ m' a( R
, k' _. [- [2 _- _+ D% F; R4 ]
xie xie