支原体检测

牙牙丫丫123

回复 goodboy 的帖子9 C/ P% v! L5 [) G

: {- F$ g5 Q8 R, `) {; T我们用的只是普通的PCR，可是每次结果都不稳定……
9 @* b$ F/ B( b/ h( q. n! b8 E

youtellme

建立个人认为:
; |  V/ {# r0 v3 v* B1现在有专门检测支原体的试剂盒，做个出判断还是可以的。
. l& l! J+ C- }1 K# z! k2 b2发现阳性了如果还想做的好点就PCR吧。方法自己选看目的了。
( P0 X) t; q$ J3 Q2 y3通过荧光检测。
  T+ }" ~# p- D3 K4平时看看细胞生长状态有个大致的判断吧。

wang3033

1.一般采用PCR检测支原体即可，一般不会有假阴性，有可能会假阳性，6 ]; ]4 L+ R! A; U- h$ ?
2.电镜，将细胞培养基上清离心，收集沉淀，电镜看到支原体颗粒是最可靠地，沙斯爆发时，由于洪院士电镜下看到病人肺部细胞中存在支原体，导致非典病因是病毒或支原体争论！最后由国外学者电镜看到病毒，并测序鉴定到非典病毒

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-8 14:27
1 S8 C9 m9 r# o: S! a回复 wwwert 的帖子7 L( h; Y" W8 K. P1 Z! z1 o

+ e7 i) j' Y9 S: l# @( n4 C  Q能分享一下你们实验室的protocol吗？

% r$ H8 |, W# \+ L1 w! O! v( }
我们用的这个引物
. R- w) x+ t4 ?( N& hFor: 5' GGG AGC AAA CAG GAT TAG ATA CCC T 3'
, K; G' v( r2 }$ D  o% q7 l# j* dRev: 5' TGC ACC ATC TGT CAC TCT GTT AAC CTC 3'
/ x( r' K) j  d0 t' }! EProduct: 280 bp& E7 W5 ]/ u- X/ N
35个循环, 3 i* q8 |( B$ a! X6 P  T
大约50ng模板,用kit提的,比较纯# O! J( a- T8 Z, n
; F4 ^% ~/ M( ]

kosmos.y

支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应（PCR）等方法。基因探针的核酸杂交法，虽然敏感性和特异性都很高，但基因探针常用同位素标记，放射性危害大，设备要求高且繁琐难以推广，近年来发展的PCR技术，使得支原体检测变得简便、快速、敏感、特异。

goodboy

回复 wwwert 的帖子8 S* J  N8 {$ N& ?
- X, G2 e: y, h7 E
你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-17 14:56   m+ v( o+ ?2 a
回复 wwwert 的帖子
3 F1 `+ @. _  b& n1 s* `4 y9 r6 l/ k, `+ K+ ]# w* ^3 J- M
你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

5 Q4 i/ G! N& Y  g4 _8 M3 |6 ?2 k" [
DNA
1 r9 H# F& \1 P应该是扩增核糖体RNA基因的

goodboy

回复 wwwert 的帖子4 ?8 H! H9 H0 }' }* |0 x; c8 N

. O% b$ P. o% Ixie xie