体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！; K- f% m, M& e) A; L8 r, q
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的
8 v6 R1 T" D! @0 s一直也没问题的
/ W( L( @: A" ?; l1 ~* @# Y不知道你的怎么就效果不好
6 d( {4 I# R& u1 ^# Q3 U& [  `考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

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1 b8 c) @) H6 n0 [' K9 i# U* R2 p
, g' y3 z$ e2 ^. N$ F7 t% K小鼠的谢谢支持

huozhicb

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: T. k( A  s! A9 [/ s
0 M' Y) F# ^* d, z$ E7 e6 o3 N谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。
" B6 `* e* C5 R) [我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？6 `- |/ y! e7 a1 X9 v( c# Q
我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。, Z  A7 Z  I: _  ]2 J8 S5 _2 C  d) b

jhu132llh

回复 huozhicb 的帖子& E* h& F9 I+ p+ b
* b. }& H/ S/ C' ^
先充气平衡然后测pH是要更加准确
: o- C# h. H: T, ^. c6 R! C8 W7 a但是一般情况下我们也不这样做
- @4 X% ?) w* z0 p2 F/ P3 m太麻烦了
, J# k/ M2 h1 M: K& n. b- b都是直接用pH计调的pH  |& c. r0 Q- C2 s0 L6 _
是的$ f5 B+ Z  R$ a  R! K: k# D
加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的& E% l; o( o" `7 @0 m2 _0 q5 G
但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的
1 W: x+ ]3 ?6 e2 v. l% }: w不影响细胞的正常生长的2 n0 E' z- W, Z8 O
只是颜色是确实有点欺骗性4 p. z3 V- G7 J* t6 D5 X- g
需要及时换液

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子2 p1 U' s# ^4 D1 z1 V
; {1 h% j2 L  m4 ^/ ?% g
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
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之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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2 E+ Y4 N; S1 z9 w我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？6 Y4 \- ^9 Y9 ^- o, H
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麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

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& H- \; d- {& \' v9 J谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！! L* h8 M6 O  h2 ?

3 w( G" h; t  x5 W4 f3 R/ t5 F之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？* z+ C, [$ c( L! a1 P, F

& t- _; @$ P8 |# a; C8 K我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
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1 K* ^* b: T" L/ q; Y麻烦版主大哥了，谢谢！