【求助】试剂盒中提质粒产量过大= =

乳杆菌

用的QIAGEN质粒提取试剂盒 说明书上说 Mega中提的产量正常是1.5g左右 但是我们得到了约4g  跑了胶 条带也没什么不正常 这个。。。 请教一下 质粒正常吗= = 怎么回事呢~~
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1 `( x7 H8 L7 G; \" N) H好像 google里面收出来都是说效率低 没见质量大的问题呢

langziforever

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0 T+ x+ A8 Z- L你要明白说明书肯定是说保证的量啊，如果说4g，大部分人都提不到4g，那不就都变成回收率低的问题了，另外，质粒产量和你宿主菌的量和状态都有关系的，这个应该是没有什么问题的，另外，不知道你定量是用什么方法，是不是准确的，一般来讲用nanodrop定的量都会偏大，如果是荧光燃料的方法还可以！

zzc2211

QIAGEN质粒提取试剂盒提出来的质粒就是多，我们实验室用过3种公司试剂盒，QIAGEN的提取的浓度最高，质粒小提试剂盒5ml菌液提取的质粒浓度能到1500ng/ul，体积50ul。既然楼主已经跑胶了，质粒条带和marker标准条带对比大体判断一下浓度也可以。质粒条带位置对，再酶切鉴定一下。高就高吧，质粒好用就行。

乳杆菌

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非常感谢~% M1 m1 ]' ?# I* v7 @% s
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我们的宿主菌量估计是大了 裂了细胞之后的溶液很黏 但是这个不是会导致产率低的吗？! K, y, P: B- Z5 g
是用的nanoodrop定量  不过实验室另一个人用这个提的质粒 量都在2g左右这样。

乳杆菌

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  P+ T( V* t* c( Y! `" r7 v% P
这样啊& d+ K% K% A( x/ ~
多谢解答~

langziforever

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菌的量太大了有可能导致裂解不充分，蛋白杂质等去除不干净，或者基因组DNA污染严重，导致质粒不纯，但不见就一定是得率低！