ips全军覆没，我该怎么办？

rongrong

回复 oucflora 的帖子! N" X7 D. @. Z" ^# Q, {

# v  j. c; N( D6 p还有那你们一般DMSO浓度到底用多大啊？

dilal

人的iPS细胞生长本来就很慢，既然有贴壁的细胞，为何不继续培养培养，看能否长起来。我们前一段时间买回来的miPS细胞也出现了这种情况，幸亏细胞收到后我们冻存了5管。传完代以后细胞大量漂浮，而且成团状，下面也有少量的细胞贴壁，换完液第二天同样出现相似情况。见帖子http://www.stemcell8.cn/thread-44333-1-1.html
% ^# o5 G0 A7 o: L1 J& ~当时怀疑是饲养层被支原体污染了，所以将细胞全扔了，剩下的冻存细胞一直没敢再养。最近一直在拿mESC摸索合适的培养条件。建议楼主暂时停下来，找到原因了再去养，查查是否有支原体污染或其它污染？

Yedan

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8 B, Q& a! {+ S! K9 Y( A! [7 t$ u7 `; E2 c% }9 p8 X" `
您不是说LZ的10%DMSO浓度低了吗，所以我想请问您冻的时候用多少浓度，还有reference是什么。至于DMSO的作用就不用您解释了……

Yedan

回复 rongrong 的帖子: U0 r! H: o* d; `2 w6 A
$ q, {1 O$ Y% ?" c: p
其实一开始我还猜测LZ你养的是小鼠的ips呢……* D1 B8 b2 R  \3 d  n
你养的是人的ips，为什么会是单细胞？我们实验室都是用针划了传代的，不会消化成单细胞的，再说人的干细胞不能像小鼠那样打成单细胞的，养不活的……
& w3 n- x% v: w* ]! d

Yedan

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3 T) l8 \$ i- L9 R% S
( |) X% O& ~+ c4 B' X' d; D应其龙的2i不是用在mES的Feeder-free的culture吗，在复苏的时候有用吗？求reference

张也行

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. I* z2 }! J% _/ L0 v% G* E2 P/ l
我觉得是因为你复苏时吹打太剧烈造成的。你是高手，应该明白人的ES和iPS传代时都是传的小集落而不是单细胞，吹打的过于剧烈，小集落不容易生存，更何况是复苏的时候呢。
, `; E. G# ^) w
7 v' b) v. B% @, G) ?8 [很奇怪你怎么知道贴壁的是单细胞呢？人的ES或iPS细胞单细胞应该很难成活吧，应该是几个细胞形成的小集落吧。

rongrong

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: }' b" Y$ O; z9 X) g! v# k* Y' R2 Q! ?2 k0 C. `# b
:'(我是用胶原酶消化的，然后复苏时要洗几遍，不断吹洗，离心，反正就成那了，我也不知道，没有吹很多次的

rongrong

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+ M2 \, ]- t3 V) t! T! w恩，算是几个细胞的小集落，但是边缘没有那么明显的界限，估计都不行了，我现在想起要养干细胞手都抖，不知道怎么来呵护它，他就会好好的。。。唉1

张也行

回复 rongrong 的帖子; D: ^# C" {) c0 D) ]9 N* f
* D; z+ K9 L% F1 B- ?$ r0 ^3 e
做实验本来就是这样的嘛，没必要这么灰心。先不要扔掉，再等一两天，如果没有污染，说不定还是会长出来呢。

cicadacjk

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9 G- j: D$ r+ x5 Y# J5 i) j4 X5 ~
. N& P9 i- A; Z/ y& J( `% V% R这位同志，你对DMSO那位版友反问来反问去也就算了，明显DMSO就是用10%的$ U& N2 P+ [; {0 ~5 s
对jefferson就没必要这样了吧
7 u9 q4 L/ @& J1 `* M/ n/ UY27632是ROCK抑制剂，可以使人胚胎干细胞可以单细胞传代，能够把0.1%的复苏存活率提高到10%，我自己观察没这么多，但效果还是非常明显的。
6 g8 c2 g: O( t: I# T至于Qilong Ying的2i是指MEK抑制剂pd0325901和GSK3抑制剂Chir99021，是完全不一样的东西。# b3 m" D/ M4 n( Y
& |" r( d2 I) u
按照WiCell的复苏方式，根本不需要离心，他们认为残留的DMSO对细胞的危害，还没有吹打和离心的危害大。如果的确需要离心，一次也就够了，晃一晃就可以了，除了吹起沉淀那下不要吹打。