ips全军覆没，我该怎么办？

rongrong

回复 oucflora 的帖子2 U: C* q0 f% ~
. g  b: V- Z3 c
还有那你们一般DMSO浓度到底用多大啊？

dilal

人的iPS细胞生长本来就很慢，既然有贴壁的细胞，为何不继续培养培养，看能否长起来。我们前一段时间买回来的miPS细胞也出现了这种情况，幸亏细胞收到后我们冻存了5管。传完代以后细胞大量漂浮，而且成团状，下面也有少量的细胞贴壁，换完液第二天同样出现相似情况。见帖子http://www.stemcell8.cn/thread-44333-1-1.html/ C: N5 |# i) E7 \" g
当时怀疑是饲养层被支原体污染了，所以将细胞全扔了，剩下的冻存细胞一直没敢再养。最近一直在拿mESC摸索合适的培养条件。建议楼主暂时停下来，找到原因了再去养，查查是否有支原体污染或其它污染？

Yedan

回复 oucflora 的帖子  d" A3 z1 m) R
' L1 x& A8 C4 i. b2 K
您不是说LZ的10%DMSO浓度低了吗，所以我想请问您冻的时候用多少浓度，还有reference是什么。至于DMSO的作用就不用您解释了……

Yedan

回复 rongrong 的帖子
- h- z# P. n) b; E5 h: s" }' E
" p. Y  N$ p7 K: t  P. c' D其实一开始我还猜测LZ你养的是小鼠的ips呢……
6 [- w0 M  X) P8 K& a; |你养的是人的ips，为什么会是单细胞？我们实验室都是用针划了传代的，不会消化成单细胞的，再说人的干细胞不能像小鼠那样打成单细胞的，养不活的……
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Yedan

回复 jefferson 的帖子
$ K+ ^$ g$ h3 j  i* P/ j3 N* W  y8 D( X, c2 n$ I5 W
应其龙的2i不是用在mES的Feeder-free的culture吗，在复苏的时候有用吗？求reference

张也行

回复 rongrong 的帖子+ f6 H: j2 d/ G
3 `) T" n( P1 O" {6 {
我觉得是因为你复苏时吹打太剧烈造成的。你是高手，应该明白人的ES和iPS传代时都是传的小集落而不是单细胞，吹打的过于剧烈，小集落不容易生存，更何况是复苏的时候呢。
' ]9 |& E4 [0 L
' @, p# l8 D' k* s3 O6 C$ z很奇怪你怎么知道贴壁的是单细胞呢？人的ES或iPS细胞单细胞应该很难成活吧，应该是几个细胞形成的小集落吧。

rongrong

回复 Yedan 的帖子5 S1 o3 e3 k1 O/ L3 ?, p) r/ |

& W  f& u( F& k6 W- `' u:'(我是用胶原酶消化的，然后复苏时要洗几遍，不断吹洗，离心，反正就成那了，我也不知道，没有吹很多次的

rongrong

回复 张也行 的帖子
. _) {) ~/ d4 ^0 {, C+ U9 a; b* |2 p* f/ q' O5 Q
恩，算是几个细胞的小集落，但是边缘没有那么明显的界限，估计都不行了，我现在想起要养干细胞手都抖，不知道怎么来呵护它，他就会好好的。。。唉1

张也行

回复 rongrong 的帖子
' ]0 ~9 \7 g5 d- l  C
  f' b% u$ }" o做实验本来就是这样的嘛，没必要这么灰心。先不要扔掉，再等一两天，如果没有污染，说不定还是会长出来呢。

cicadacjk

回复 Yedan 的帖子/ J( r' |" N: i- z2 e
" I8 I' g; |% V& u7 r1 W; k
这位同志，你对DMSO那位版友反问来反问去也就算了，明显DMSO就是用10%的0 G! k" M# s, r! k7 b
对jefferson就没必要这样了吧
3 K, {- A3 t( `" V1 L# QY27632是ROCK抑制剂，可以使人胚胎干细胞可以单细胞传代，能够把0.1%的复苏存活率提高到10%，我自己观察没这么多，但效果还是非常明显的。
7 G% i1 f& t. Q6 `至于Qilong Ying的2i是指MEK抑制剂pd0325901和GSK3抑制剂Chir99021，是完全不一样的东西。. I4 D. \" U4 o" z2 O! `
6 |) ^. D5 G9 d% f; s5 J
按照WiCell的复苏方式，根本不需要离心，他们认为残留的DMSO对细胞的危害，还没有吹打和离心的危害大。如果的确需要离心，一次也就够了，晃一晃就可以了，除了吹起沉淀那下不要吹打。