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我从去年5月左右就开始培养BMSC,取原代后两三天细胞均贴壁呈长梭形长得很漂亮。但是不知道怎么回事,最近两个月以来,取原代后培养液呈很浑浊的黄色,像洗了肉的水一样,因为我用的是直接冲洗骨髓腔200目筛网过滤后不离心直接培养的方法,细胞不纯,可能是里面的其他细胞死亡悬浮造成,但问题是基本上没有贴壁细胞,换液两次后就只能扔掉。操作和去年一摸一样,所用的试剂也相同。
) ~2 g1 T7 c m$ ?" o1.处死4-6周SD大鼠,酒精浸泡5-10分钟。
$ q( i" B Q; d9 A7 i2.取股骨、胫骨,剔除肌肉筋膜,浸泡在含双抗的PBS内。! K4 }8 W. H) R% ^
3.进一步剔除骨表面附着的骨膜,剪开两端骨骺,用注射器吸培养基冲骨髓腔,收集。, g* r6 Q {8 ]: b0 A3 l
4.200目筛网过滤,(前两天试了一下在这个地方加上离心5*1000转/min好像效果要好一点,离心后吸弃上清再加入培养基制成单细胞悬液),吸入培养瓶中。5 a/ E/ K7 V, d1 N
拜托各位给点意见,帮我分析一下问题出在哪里。$ Y3 ]9 H7 f$ h/ J' d$ Q
非常感谢!
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