Percoll 分离小鼠淋巴细胞 最上层的细胞是什么？

zerollx

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最近做了一次淋巴细胞的分离，分离方法如下：6 x8 V9 @+ e" ~) z- u( O  K4 d+ K$ i
     1．取4ml的70% Percoll 加在15ml 离心管的底层% r% M: P. C" ^# v
2.再取4ml40%Percoll，铺层，形成第二界面" o+ c/ r% j8 x, X" a4 ]+ f& K
3.将用红细胞裂解液裂解后的细胞用1ml的DPBS重悬细胞，缓慢将其加到分离液的表面，注意勿破换界面。离心后形成分层如下：$ C& B- f% W# ^) @- q9 y
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  `, N+ d2 M* O" e, B4 j; [    标问号的那一层白色云雾状是什么细胞？因为分离之前已用红细胞裂解液裂解，洗涤了3遍，是血浆的可能性应该不大，而且血浆的颜色也不应该是白色的吧，所以很好奇，望有大家指点……

wang3033

是么细胞都不是，是Percoll和DPBS的分界面形成的折光带

meister

支持，应该没有细胞了

zerollx

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回复 wang3033 的帖子/ s2 @1 a5 ^! v8 p" g. k

9 q# h! \  p% H6 P6 Q2 _图片上也许看不清楚，但是确实是一层物质而非折光带，我同时也做过另一个方案，是将细胞用40%的Percoll重悬，再加到70%Percoll中，也得到类似的结果，但是不同的是形成的不是一条很细的带，而是很宽的区域，给你看图
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meister

如果你觉得是细胞， 可以将这部分单独去除，稀释，离心，镜下观察， 就知道有没有细胞了， 如果有，拍个照片看看

wang3033

那个部位一般不会有细胞的，最多是脂蛋白等的血清成分或许是细胞碎片或是亚细胞结构，我只能推测，你最好把那部分按血涂片处理一下，显微镜下观察，看有无细胞存在？

zerollx

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嗯，悔不该当初直接将其扔掉而未观察，下次再观察……

weisong1015

你好，我也是做的小鼠的单个核细胞，你用Ficoll法取得单个核细胞吗？但我从网上看到，获取单个核细胞是用免疫磁珠法或是流式细胞术获取单个核细胞呀

weisong1015

我还有一个疑问？你为什么用PBS重悬呀》PBS的颜色与分离液的颜色近似，中间云雾装的单个核细胞层很难获取，会丢失细胞，问什么不用DMEM呢。

ACQDONGYING

版主：
0 o  I# t) V- B我近期准备做小鼠肠道LP淋巴细胞的分离，所以查阅了了一部分资料，很多人提到了PERCOLL梯度不分层的现象，你是否也遇到过相同的问题或你觉得可能的原因是什么？方便的话是否可以把你处理PERCOLL的配方发我份，我的邮箱acqdongying@163.com,谢谢啊3 W% C1 E; q5 [  ~6 l9 C