新手ips培养18天形态请教

jefferson

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1 U# z+ @4 V+ t8 D
' P8 {. [8 }) N$ }6 _4 H' N$ o; s最开始是用AP染, 很多克隆会有比较弱的信号. 然后我们做了免疫荧光染色, 用TRA-1-60和TRA-1-81都染过, 有些不完全诱导的克隆也能在镜下看到很弱的阳性信号. 把这些弱阳性的克隆挑出来后, 其甚至可以连续传20多代, 仍然保持克隆形态, 只是和iPS或ES克隆不同, 这种克隆不平坦, 不够致密, 也无法形成EB. 因此我们推测其可能是比较接近iPS的不完全诱导克隆.
  B  M% E( l$ e" d' H# k" s% J- f' J$ l: Q/ I1 j
仅仅是我们实验中的现象, 拿来大家一起讨论
2 p$ @1 f- I9 L6 l. z( u3 j. s: {2 a

song58

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( i) E3 V: b) U7 p, ]" j' i4 Z; H( J3 Q3 r
厉害！敬仰！说实话，我真是佩服你的耐心和毅力！9 I7 S- |1 W* s
20多代，100多天呀！我很好奇：
% u2 N" r, k9 z1、这些克隆是转基因的吗，外源有沉默吗？, J: T9 e" i3 p; H4 v9 t
2、这些60&81弱阳性有多弱，和阴性对照比是怎么样？' c4 I( k+ g& d! y) U
3、在这20多代中，那些克隆的形态有没有明显的变化呢？增殖情况如何？会不会养着养着就散了呢？
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jefferson

song58 发表于 2011-11-18 10:23
( u6 o$ M8 U: c: Z回复 jefferson 的帖子
' Z& d2 n1 v5 L3 S
: S* [6 G; q+ v8 O4 L( P2 j厉害！敬仰！说实话，我真是佩服你的耐心和毅力！

1 x+ M9 u) G: G. p  ^9 i3 n- T
看到这样的克隆, 我也是比较奇怪. 所以就顺带的把几个这样的克隆一直养着看会有什么样的变化, 后来因为方向不同,就没继续了. , l+ X; G0 v9 a
" Z- [8 X' Q8 c/ r1 W9 _
对于你的问题: ) }4 `. \) S8 ?* k- ^
1. 我是用逆转录病毒转的四因子加GFP做的, 在这种克隆中, GFP表达非常弱, 但又不像完全诱导iPS克隆那样是完全沉默. 镜下能看到类似背景信号的荧光, 但不好下结论其完全沉默了. - \  D! q8 S; ^! _8 w; o/ k; @9 X
2. TRA-1-60以及81的染色中, 信号很弱, 但和背景比, 在普通荧光显微镜下(非Confocal), 还是比较容易观察到的, 但和ES或者完全诱导iPS那种很亮的结果比还是有很大差距. 那种完全诱导的在镜下快速的扫片就能发现, 这种不完全诱导的仔细观察才能看到. + @3 k0 W7 p# Q  ^' X, M8 O( u
3. 这种克隆比较奇怪, 传了20多代形态上和前几代基本相同, 增殖速度和ES及iPS差不多, 基本6天传一次. 每一代中, 散了的克隆,或者说失去形态的克隆比较较高, 但大部分还是能保持克隆形态的.2 N& c* W9 l) ^$ u8 {% G
7 M( V8 m4 l. k! `
这种克隆及其不完全诱导机制很多人都在关注和研究, 因为我们的方向不是这个,所以就没做了. 希望有做这个的同学或老师能有所突破.

song58

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# X" k; l8 \8 s' G谢谢jefferson分享你的经历！受教了！

liuzhenallen

这个应该不是ips克隆，正常的ips克隆是有明显的界限的，虽然你的照片并不是很清楚，但基本可以推测这是诱导未成功的细胞生长而成 ，我在早期最ips诱导的时候也会经常碰到这种情况，建议多重复尝试几次，总会成功的

majing217

这个应该不是IPS,IPS是呈克隆状的，我们没有看到。

wangyimei

学习了

znbr044

不是克隆，可能支原体污染了

jane2011

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9 K! E$ j7 X8 H5 z  G. [( u
! r9 I" [" E$ f5 d可是我的所有培养基中都加的有支原体移除挤啊，不过都加的是预防剂量。