慢病毒和逆转录病毒的选择

lytanxiangshan

关于慢病毒和逆转录病毒的选择，主要看是否稳定还是效率，还是操作难以呢，新手球经验

asasy

逆转录病毒只能感染分裂期细胞，慢病毒可以感染 非分裂期和分裂期细胞，所以慢病毒适用范围大。不过选哪种病毒也不一定，很多时侯是看个人习惯，我以前国内的实验室是用逆转录病毒，现在的实验室是用慢病毒。

ellapan

逆转录病毒即RNA病毒，需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA，再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。逆转录病毒是RNA病毒，它有三个基因：gag-编码病毒的核心蛋白；pol-编码逆转录酶；env-编码病毒的被膜糖蛋白。有的逆转录病毒还带有癌基因（vonc），即有的逆转录病毒有致癌作用。近年来，已设计构建成一些缺陷型病毒（defective virus）使逆转录病毒成为有用的基因载体，成功地把抗药性基因转入了人体造血前体细胞，并在细胞中表达。Hock等选用了缺失编码病毒外壳蛋白基因的逆转录病毒，因此不能合成自身的外壳，但它有识别外壳蛋白进行包装的信号（一段尚未鉴定的DNA顺序）。用这种缺陷的逆转录病毒去感染某种细胞株，这种细胞株包含有辅助病毒（helper virus）。辅助病毒能合成蛋白外壳，但缺失了识别蛋白外壳进行包装的信号，因此它不能包装成病毒颗粒。当用逆转录病毒感染细胞株后，逆转录病毒的RNA进入辅助病毒的外壳蛋白，成为病毒颗粒。这时把受感染的细胞同骨髓细胞一起培养，包装在辅助病毒外壳蛋白中的逆转录病毒RNA，进入骨髓细胞，病毒DNA插入宿主细胞基因组，基因的活性得到表达。这时，由于骨髓细胞里面没有辅助病毒，所以整合进宿主基因组的逆转录病毒，不再有外壳蛋白可供包装，因此也就无法增殖，而只能被“陷”在宿主基因组中，通过细胞分裂而传给下一代子细胞。  s! d! f6 G* o4 `
　　1970年科学家在致癌RNA病毒中发现一种特殊的RNA病毒聚合酶，该酶能以RNA为模板，根据碱基互补原则。这一过程与一般病毒转录方向相反，故称逆转录，催化此过程的酶称为逆转录酶,后来发现在哺乳动物的胚胎细胞和正分裂的淋巴细胞也含有。& n$ H. z( z2 T5 I
　　逆转录病毒又称为携带逆转录酶的病毒，它先侵入宿主细胞以病毒RNA为模板，靠酶形成DNA环化，然后合到宿主细胞的染色体中去以原病毒形式在宿主细胞中一代代传下去。( I) ?- e4 e# ^% C/ _
　　【逆转录病毒分类】* G* s; Y; W' |9 D
　　按照目前国际病毒分类标准，逆转录病毒科分为7个属：! G6 x6 f* C+ X" ^/ S) c, t) b
　　α逆转录病毒属 Alpharetrovirus
% Z, j" y$ u3 F, }　　β逆转录病毒属 Betaretrovirus! M' @% Y8 z  @% s% H7 K
      γ反转录病毒属 Gammaretrovirus
' }' K: j; X$ v7 p　　δ反转录病毒属 Deltaretrovirus' c$ p8 q; j, ^2 ?/ E) x% w

2 k* o7 ~3 F4 P2 J  m6 o5 x　　ε反转录病毒属 Epsilonretrovirus; W6 z9 r* G4 r* ]/ k8 O1 h
. q6 n$ }% |1 r# C$ U  N9 ^$ @
　　慢病毒属 Lentivirus# Y" w3 ?/ c  |
; n/ h6 P" E! O& h, _9 l; V5 u$ ^. V
　　泡沫病毒属 Spumavirus
' _% D' t3 X6 C$ n8 F1 P
6 Y* |( v7 y- g# R　　其中的慢病毒属又分为5个组，包括牛慢病毒组、马慢病毒组、猫慢病毒组、羊慢病毒组和人类慢病毒组。HIV在病毒“大家族”中的定位是逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。根据生物学的分类，逆转录病毒可以分为7个属，在这些病毒当中我们最熟悉的是人类免疫综合症（HIV）。HIV在病毒“大家族”中的定位是逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。
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张也行

我觉得看你要感染的细胞是什么类型的，慢病毒的宿主范围更大，但是第三代的慢病毒载体要四个载体共转染，比较麻烦。所以你可以查查文献，前人是用哪种病毒，效率如何，然后再决定，不是慢病毒就比逆转录好。还有就是看看你们实验室经常用哪种病毒，没必要为了提高一点效率就去建立新的体系，太浪费。

hany2007

其实逆病毒比慢病毒从原理上讲要安全，我建议你使用retrovirus，至少心里踏实点。pBabe系列的效率还是挺高的

lytanxiangshan

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% ]) d, }6 Y6 A, Y& k$ S* m" I7 b
% L  f/ N" I& b4 K( k  R: q+ G$ L你好，我们实验室刚开始做这方面工作，是做成纤维细胞的ips 。先做小鼠后做人的ips，没有成熟的体系，所以才拿不定主意的。。

lytanxiangshan

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4 Y& i& ~. o, `# j* }2 ~1 m# c
! \- H, D; V- p/ z( _- t请问有没有先进或落后之分呢？

张也行

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3 S1 p/ H9 D1 h% v+ c$ {+ @( F9 i. \+ b9 {$ `  c
慢病毒技术确实是后出现的，但是我觉得不能说慢病毒就比逆转录病毒先进。单从安全性上来说，逆转录病毒还更安全，因为慢病毒毕竟是用HIV病毒改造过来的呀~~

gbbj

我推荐使用慢病毒，感染的宿主范围很广，效果很好

zhaoyinggirl

恩，我也推荐慢病毒，我们实验室现在都在用慢病毒感染
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