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本帖最后由 hnsdlgl 于 2011-11-17 09:20 编辑 & m3 b! c' X" @6 n/ @% K% ]& T3 [
1 _7 j, S" F% q% T情况是：这是用脐带做的组织块培养，第一天铺完组织块后（当时组织块上附着的有培养液），因为一些原因没及时加液，6天后才加的培养液10ML，到现在是15天时间过去，细胞是长出来了，但是形态不是很好，有点像帖子上说的“核溃散”，不知道是个啥情况。我的问题：- y! c" I6 C& g8 M5 `: C9 K
1.如果是间充质的话，但是传代后细胞为什么不贴壁。
4 ~0 V1 K$ V7 @' o8 b* \2.如果不是MSC，那是什么细胞？
4 m( a, P5 U2 b: D. L: |# ^9 p$ [3.是不是老化了？一些细胞形态变化很大！"
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根据你的实验过程描述，我有一个问题：你第6天加培养液之前，培养瓶是否已有部分干了？加培养液时，用的什么血清，浓度是多少？) W5 i" ^' X% E: D
$ f0 t2 S+ h+ Y. y3 [3 _你的细胞形态是MSC，但是如果消化后传代，那就大部分不是MSC了，而是MSC碎片，因此也就回答了你前面两个问题。
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' J5 U* B* P) j! q- b* a, ]其实，你对问题的分析也基本正确，这种情况可以说是细胞出现了老化，更是受伤的表现。
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4 K. }2 }/ P, o& i b7 f! S$ r细胞培养过程中，培养基至少给细胞生长提供了三个方面的作用：' E8 K- t; [; w5 j/ b
1. 合适的pH、渗透压，以及某些营养条件- Y7 Q3 K' w4 c" M4 h; I
2. 一个比较稳定的代谢交换体系：活的细胞都要代谢，代谢产生的垃圾直接排入培养液，因此，我们隔一段时间就要换液，主要是保持培养液的新鲜，不然自身产生的垃圾直接伤害自己；或通过改变pH、渗透压等间接伤害自己。( C6 V% c0 n, l$ r3 Q) i' y* x. z
3. 屏蔽高浓度的氧损伤：氧在溶液中的溶解度比大气中的低得多，从而达到一定的较少氧损伤的作用。- @6 m( o T4 e% f( l0 E6 i6 z
$ k. V2 m! w1 r6 X4 ~* w1 Y6 E( s% Z. _同时，细胞培养过程中，血清主要的作用时两个：2 ~# \" ?9 ~& z* ^# }' D+ ^+ D; L' y
1. 提供充足的营养
+ i9 u* U8 b4 H) }! D2. 提供细胞生长所需的生长因子0 T& F* F/ z5 c
以上两点，也是为何我推荐使用进口血清的原因，四季青的血清看上去就很稀薄、清亮，其营养没有那么充足，生长因子几乎缺乏。只有运气好的时候，偶尔可能碰到一两批可能可以用来培养MSC。
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% y2 q z U1 K$ Y3 c- U你换液时间太长，细胞可以因为生存条件恶化而受伤，而可能因为营养缺乏而老化，所以出现你所述结果。
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【个人观点，仅供参考】 |
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发表于 2011-11-16 19:30
发表于 2011-11-16 23:51
。还有可能是加了抗生素，有一定污染。