求助，我这还是间充质干细胞吗？

zhang0194

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: d9 E; {( S! Y$ w0 E( \" i
" }. f5 g0 _* d6天加液的时候，瓶子里已经有点干燥了！

zhang0194

回复 zsc78 的帖子" x( {* H% |$ g, [5 `9 e6 a" `7 c
" E* Q& G' S2 C* m" J( m$ e
没有加抗生素，无血清培养基做的，污染的话是怎么个情况，望先生明示。。

hnsdlgl

zhang0194 发表于 2011-11-17 11:19 " S7 i; \, \; J: M& K
回复 hnsdlgl 的帖子5 u+ t' e! h9 t3 B& W, @5 X

6 {' ]# H' [3 c1 {6天加液的时候，瓶子里已经有点干燥了！

+ h0 E3 @" A* f8 R" E9 m从细胞形态，我估计也是这样。
& R) j) U0 S& M3 r# {+ g' ?: S瓶子里培养基体积发生明显变化时，渗透压、pH都会发生很大改变，这种改变对细胞来说是很要命的。所以就出现你看到的奄奄一息的样子。

hnsdlgl

) x7 p9 Y0 d( g. V" Q4 ?+ I

zhang0194 发表于 2011-11-17 11:17
& z; t& Z/ l' F* J* W3 s, {回复 hnsdlgl 的帖子
" s" N% D" _" Y; E# s! z0 _% O2 |/ x# R9 k9 W$ @
用的是无血清培养基！消化的时间很短暂，主要靠吹打，是不是形态变化以后比较“不耐受 ...

1 B- Q" E5 d( y! X$ }" o6 w! V. @/ [# O+ L0 k" ]6 ]3 _& f% ?
培养基用得很好啊，呵呵。
' |* C$ S3 b6 G+ {/ Y7 _: q" x从对细胞的损伤来说，我们通常说三种损伤：
' ~! L3 t% e3 a3 ]7 Z3 ~3 F- W1 x0 z1. pH、渗透压改变导致的损伤，此损伤如果时间很短，是可以恢复的。
$ ?0 b% x' ^/ G2. 胰酶导致的表面粘附因子的丢失，此类损伤导致传代后细胞贴壁困难，因此胰酶消化后要离心，消除胰酶的持续作用，原则上，只要不太过，细胞也是可以恢复的。/ P5 [# A: Y9 X6 l
3. 机械损伤，如传代时吹打引起的损伤，这类损伤稍不小心，就直接把细胞打成碎片了，那结果就不用我说了。
$ o7 E1 k3 Y; H6 d" n我估计，你的细胞本来就很受伤，加上你这么一吹打，大部分变成碎片了。$ l) `% k3 x# B( E  v+ H- X

4 U% C% x- g+ S0 ]1 r1 g; A' ~4 g因此，总体说来，胰酶消化比过多的吹打对细胞的损伤还要相对温和。 不过，我还是建议不用吹打，而用拍瓶的方式传代。4 ?& d6 z* ?) S- T: p
- d- h% h2 R, w- k- Y
有关拍瓶传代的详细过程，我已经在别的帖子中详细说过了。
6 Z: m- h# U. [- U7 C$ n1 B具体过程，请见“我的小鼠骨髓基质干细胞正常吗？”（第8楼我的回复）$ ^0 N2 J% o' f" W
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... ge-1.html#pid517995' M0 R. H( l9 g7 `, ?  w
。

zhang0194

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3 _* n& p" l' r/ [5 D3 K* d( m: l  q6 o; G9 @
看了，我这里做临床，用血清是不行的了，抗生素也不能加，所以一般只要是有一点问题就要丢掉！平时都是用培养液终止消化的！

不苦的药

回复 wangzhiqi86 的帖子! R- Y$ ]" x0 x( X2 H* L/ h1 e; K* c

# X1 i, V& V7 c5 n: r; \你觉得细胞比较沙，可能有哪些原因呢

deshenglll

细胞状态很差。细胞都成不规则的长形状了。

henryjia

回复 天枰2012 的帖子/ Z5 q7 q6 Y) V- y" U7 H

3 O+ N. I0 f  a* \1 y$ e脐带最好尽快处理。比较过2小时内处理完结果远远好于6小时以上。2 w  q' E( N" [  C9 O0 {

% t7 c) K+ X8 g" D0 Z$ p第二，脐带MSC个体差异性非常明显，不要期待每次结果都一羊。
8 V2 n/ v& ]! D$ Q. c
( u8 A$ {4 S; ?* Q. v第三，如果发现细胞老化，必须‘壮士断腕’立即终止，否则只会浪费更多时间。
( f9 L1 `8 h, _" P  @% r! D# |7 q% g/ m- C* k* E8 p
最后，预防老化发生的关键是一要快，而要温柔的消化组织。

azzyou

跟你间隔较长时间才换液是分不开的，时间长了以后培养液稀了，细胞营养就跟不上了。

ylj

是间充质，但已严重老化，可以直接放弃了。4 v6 i" ^, s6 }5 C, ]
我们是用酶消化法分离获得的，原代也有少数类似这样状态差得细胞。- K" P4 I! t4 ]8 {  @; i% X0 w( t
一般用组织块贴壁的话，我们第二天就不加培养液，等细胞长出来后，第一次换液时就用枪将较密的细胞轻轻吹打下来再原皿中继续培养。