求助，我这还是间充质干细胞吗？

zhang0194

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7 a. D5 j* R' D( v& y: ?) E8 E6 j9 K0 M1 c& \
6天加液的时候，瓶子里已经有点干燥了！

zhang0194

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+ Z  A3 [+ d& [7 b. n+ F
) r& A# a( U5 O. C. k/ _没有加抗生素，无血清培养基做的，污染的话是怎么个情况，望先生明示。。

hnsdlgl

zhang0194 发表于 2011-11-17 11:19 6 W, }* J6 O! u
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% n6 E$ V$ T# E  o% A0 z* H  ]
8 P( V. F6 @: V, ]! \/ ?+ o# U6天加液的时候，瓶子里已经有点干燥了！

& w4 O; U/ H1 ^9 t+ _- s4 q- j从细胞形态，我估计也是这样。
; M/ }- O9 z/ u$ ?瓶子里培养基体积发生明显变化时，渗透压、pH都会发生很大改变，这种改变对细胞来说是很要命的。所以就出现你看到的奄奄一息的样子。

hnsdlgl

  Y# k9 x- d1 W( Z. p

zhang0194 发表于 2011-11-17 11:17 # Y/ Y) W+ k6 U1 u8 m) i& r2 @
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5 x, g* y7 p; ?% y0 U  x9 \
! l. `3 P5 c8 k0 T$ Z用的是无血清培养基！消化的时间很短暂，主要靠吹打，是不是形态变化以后比较“不耐受 ...

! t& S) U! ]% x; @5 [% F  u
: W- k' c* y- O5 T- c+ Y0 N培养基用得很好啊，呵呵。
* Q% z' |* K  S. d! s$ |& k% G$ ~从对细胞的损伤来说，我们通常说三种损伤：
9 W9 _  ~1 I# S# ?1. pH、渗透压改变导致的损伤，此损伤如果时间很短，是可以恢复的。
% z% m2 ]) F: }; L! E, Y2. 胰酶导致的表面粘附因子的丢失，此类损伤导致传代后细胞贴壁困难，因此胰酶消化后要离心，消除胰酶的持续作用，原则上，只要不太过，细胞也是可以恢复的。
4 {0 a$ |- e$ z) ^" s3. 机械损伤，如传代时吹打引起的损伤，这类损伤稍不小心，就直接把细胞打成碎片了，那结果就不用我说了。
) K" e; b7 F# e7 x/ l7 F我估计，你的细胞本来就很受伤，加上你这么一吹打，大部分变成碎片了。
4 P& h5 w& J  ?) g& r5 y1 i" I% J" f5 w! D! d4 J) z# w
因此，总体说来，胰酶消化比过多的吹打对细胞的损伤还要相对温和。 不过，我还是建议不用吹打，而用拍瓶的方式传代。/ C( z, w; S  ^( j
4 U3 z* A. I4 g& C# P% }
有关拍瓶传代的详细过程，我已经在别的帖子中详细说过了。
0 y, J! W2 I+ Q+ b0 U8 e具体过程，请见“我的小鼠骨髓基质干细胞正常吗？”（第8楼我的回复）! B4 Q  T: v, o8 B
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... ge-1.html#pid517995
* o& T" k1 Y; C" K1 F9 O9 x; ]。

zhang0194

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& \, f( }; q% W" p7 z1 X7 r
8 {2 O$ K# t) T, ]0 }; x5 N看了，我这里做临床，用血清是不行的了，抗生素也不能加，所以一般只要是有一点问题就要丢掉！平时都是用培养液终止消化的！

不苦的药

回复 wangzhiqi86 的帖子$ W% l9 d5 c: |) V, p9 C+ t( n

" y" |" Y# x0 {  L; Z你觉得细胞比较沙，可能有哪些原因呢

deshenglll

细胞状态很差。细胞都成不规则的长形状了。

henryjia

回复 天枰2012 的帖子7 s0 m) G1 v* ~+ S5 D0 j, h; `# {
6 C) @6 ]/ l4 z
脐带最好尽快处理。比较过2小时内处理完结果远远好于6小时以上。2 Y: N4 j$ p1 t
9 @/ s3 M2 K, o' J0 S- ~' P5 |
第二，脐带MSC个体差异性非常明显，不要期待每次结果都一羊。
) o! H% Q+ R" [: G0 I: F
8 _8 O4 X9 z, ^0 O$ Z第三，如果发现细胞老化，必须‘壮士断腕’立即终止，否则只会浪费更多时间。$ }" y) J$ n% T3 E8 n6 x. t& n, Z
" y3 ~% f! k1 |( G- c; F6 {) P
最后，预防老化发生的关键是一要快，而要温柔的消化组织。

azzyou

跟你间隔较长时间才换液是分不开的，时间长了以后培养液稀了，细胞营养就跟不上了。

ylj

是间充质，但已严重老化，可以直接放弃了。
8 v6 Q7 U1 q8 w( W7 e我们是用酶消化法分离获得的，原代也有少数类似这样状态差得细胞。6 V$ p& _/ M7 R8 a/ V* G7 J
一般用组织块贴壁的话，我们第二天就不加培养液，等细胞长出来后，第一次换液时就用枪将较密的细胞轻轻吹打下来再原皿中继续培养。