求助，我这还是间充质干细胞吗？

zhang0194

回复 hnsdlgl 的帖子3 ^9 L) z" i$ L) `0 u7 A" U3 a% z

; F% c. W8 k' N: }* D* I$ F6天加液的时候，瓶子里已经有点干燥了！

zhang0194

回复 zsc78 的帖子# W+ b- g, L( ]6 m# |6 s9 Y

2 S) S, |9 {( [; w  U* z# ?, l% A& m8 \没有加抗生素，无血清培养基做的，污染的话是怎么个情况，望先生明示。。

hnsdlgl

zhang0194 发表于 2011-11-17 11:19 ! {( h5 M# Y; P1 ~  W
回复 hnsdlgl 的帖子2 C5 K# j2 m/ `
9 m) ]- t; z) G% X5 B7 Q( I# h
6天加液的时候，瓶子里已经有点干燥了！

% ?0 T. R% r! @6 t从细胞形态，我估计也是这样。! w. z1 e1 `7 g5 Z/ E8 i; t
瓶子里培养基体积发生明显变化时，渗透压、pH都会发生很大改变，这种改变对细胞来说是很要命的。所以就出现你看到的奄奄一息的样子。

hnsdlgl

  U; m/ S: Q5 o, e: X

zhang0194 发表于 2011-11-17 11:17 # w, O% H6 k' g+ X5 ?' _7 X5 D; S  K
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) `) ?3 T9 a, V! f5 h: z: X- W! L6 U- L( o0 G' z3 ]
用的是无血清培养基！消化的时间很短暂，主要靠吹打，是不是形态变化以后比较“不耐受 ...

/ X, `* G% W8 u. ~

, p4 V' ~( P6 v- v培养基用得很好啊，呵呵。
% b' A0 O. k* Y2 s从对细胞的损伤来说，我们通常说三种损伤：
$ O' V# l9 b) A3 i2 u9 w( \* g8 K1. pH、渗透压改变导致的损伤，此损伤如果时间很短，是可以恢复的。2 h& V9 W% A2 p4 k2 f
2. 胰酶导致的表面粘附因子的丢失，此类损伤导致传代后细胞贴壁困难，因此胰酶消化后要离心，消除胰酶的持续作用，原则上，只要不太过，细胞也是可以恢复的。
- I: g) h+ @% e- Q* A5 M3. 机械损伤，如传代时吹打引起的损伤，这类损伤稍不小心，就直接把细胞打成碎片了，那结果就不用我说了。
" ^. v! G. h0 M6 w$ x; i2 z我估计，你的细胞本来就很受伤，加上你这么一吹打，大部分变成碎片了。) n4 ^/ ~  \7 P: W0 i+ U) N# S
, c; b3 N8 i  _9 V! s
因此，总体说来，胰酶消化比过多的吹打对细胞的损伤还要相对温和。 不过，我还是建议不用吹打，而用拍瓶的方式传代。" f+ ^% @7 ~( Q7 r

1 e- b# ?5 Y% ^) A% ]+ b4 d* z有关拍瓶传代的详细过程，我已经在别的帖子中详细说过了。
& K, N3 i2 k( ^5 j( \0 |具体过程，请见“我的小鼠骨髓基质干细胞正常吗？”（第8楼我的回复）
. \! [* S4 s5 `http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... ge-1.html#pid5179953 Q" p% w0 {! S% l" s8 g4 G! r
。

zhang0194

回复 hnsdlgl 的帖子) i) Q& i" [4 V( d6 ~

' V5 W) ^5 ?5 y8 a7 l. i看了，我这里做临床，用血清是不行的了，抗生素也不能加，所以一般只要是有一点问题就要丢掉！平时都是用培养液终止消化的！

不苦的药

回复 wangzhiqi86 的帖子
, Q$ c, @+ z- w' I; {* Y2 L1 [- N/ a0 n4 u8 f
你觉得细胞比较沙，可能有哪些原因呢

deshenglll

细胞状态很差。细胞都成不规则的长形状了。

henryjia

回复 天枰2012 的帖子
% p9 o! r; J! K& k. y& x* p$ s; @) h4 [+ {6 h$ c) J; j0 @
脐带最好尽快处理。比较过2小时内处理完结果远远好于6小时以上。6 D2 U* |0 [2 p; `" ?. |# |# \! ?
6 R" b  o9 y# U/ i
第二，脐带MSC个体差异性非常明显，不要期待每次结果都一羊。8 e% Q4 p" ^: G" z: o8 l

, @4 ~2 A' V0 x0 U第三，如果发现细胞老化，必须‘壮士断腕’立即终止，否则只会浪费更多时间。7 M7 H! I( h8 x; J" ^8 K( T

0 P+ D! ?  h( [9 {  F最后，预防老化发生的关键是一要快，而要温柔的消化组织。

azzyou

跟你间隔较长时间才换液是分不开的，时间长了以后培养液稀了，细胞营养就跟不上了。

ylj

是间充质，但已严重老化，可以直接放弃了。8 m6 F9 `  C& m9 d( ~7 @& n$ v
我们是用酶消化法分离获得的，原代也有少数类似这样状态差得细胞。
  W6 K# J' M* E) |9 `+ D一般用组织块贴壁的话，我们第二天就不加培养液，等细胞长出来后，第一次换液时就用枪将较密的细胞轻轻吹打下来再原皿中继续培养。