关于组织切片中GFP的检测 - 实验室综合讨论区干细胞之家

干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 › 干细胞之家论坛 › 干细胞实验室技术交流 › 实验室综合讨论区 › 关于组织切片中GFP的检测



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

楼主: phdyhm	go [讨论] 关于组织切片中GFP的检测 [复制链接]

dianying

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 361
威望: 361
包包: 1970

优秀会员

11楼

发表于 2011-11-29 09:57 |只看该作者

回复 phdyhm 的帖子! s) U1 _. |( z" Z7 L8 A6 [
[/ A$ Z3 q3 @# D# K: l! q# I- { ]
Try 10x Citrate Buffer pH 6.0

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

goodboy

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 429
威望: 429
包包: 1000

金话筒优秀会员

12楼

发表于 2011-11-29 10:11 |只看该作者

GFP蛋白荧光是要在其非变性时才能显现出来的，经过甲醛变形之后肯定不会有荧光。所以你应该做石蜡切片

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

zxcv12345

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 598
威望: 598
包包: 77

金话筒优秀会员

13楼

发表于 2011-12-5 19:07 |只看该作者

回复 phdyhm 的帖子
! m+ g' ]: I# s" j/ j- I# K& _$ A% E
我用甲醛固定细胞系，GFP没有问题。没做过冰冻切片。你可能的原因是可能固定时间过长。减少固定时间看看，做个时间梯度，看看在那个时间段GFP信号丢失。
荧光镜下可看到银光，应不是蛋白降解
乙醇、丙酮不能固定GFP表达蛋白。