如何才能高效转染MSC?

luoziwei

回复 xintianaric 的帖子+ m* c0 ?$ |  R8 u$ v8 ]

: [- V: A4 m. X5 d
- f9 ^% q! v8 P" ainvitrogen的专门做hMSC的转染试剂，标准的protocol。这是我用passage 8的细胞转染的，供参考。效率至少有50%以上

wateryong

回复 xintianaric 的帖子4 s+ A+ P$ |6 ]
8 ?$ N3 M/ I; f( @% S8 y
我最近也在做转染，我用的是逆转录病毒。9 C* x# p" s6 [& w4 T
1、包装细胞的密度要合适50%左右。% ^4 K# V8 g) ]* N# a+ A
2、配置转染体系的时候用无双抗的培养基去配。/ H" W6 u, H( x6 z
3、如果病毒滴度低，提高培养的血清试试。7 h6 Q2 p7 p4 t; G% o. F
4、目的细胞的密度也要合适，保证病毒感染的时候细胞正处于分裂最旺盛的时候。
2 p1 L, w% b, b: S% ?

telomerase

用病毒的话效果很好啊，然后一分选，ok了

ditiger

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7 O7 h9 R" w8 P( G7 v6 ^8 m2 C, ~$ I$ {% ?2 Z
脂质体转染效率非常低，我们的也是这样，不到10%，但用病毒非常好，流式检测99%多，所以还是用病毒吧，虽然贵点~~

阿朱111

如果用脂质体转染的话？效率能达到多少呢？能达到20%吗
: C4 Q8 a! G6 ~! {) h. w

hhxxattxs123

回复 luoziwei 的帖子6 K$ e7 X; K/ D; m
8 F' r/ R- ^" u3 F! N( {! {& n( N
脂质体转染间充质干细胞能够达到50%以上啊？真的吗？我们也是用的脂质体转染的，效率一直上不去啊，你能不能告诉我你们是怎么转的呢？

guokeliuhen

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( M% i+ C+ \- Y9 z- P/ n2 E4 f2 n) B; l1 S! g# U* x: J4 N
nucleofector是电转染呀，当然比脂质体效果好啦；invitrogen的一个仪器也可以做电转呀。还有一个日本的一个叫NEPA的仪器，做电转染都不用试剂盒的，当然这些电转染仪主要针对的是原代细胞之类的难转染的细胞的。

zxcv12345

回复 guokeliuhen 的帖子
* N: C: u3 [0 v" Q
; m" {- e# a3 ~对原代细胞主要电转或病毒转染，脂质体效果都不好

quge_00

回复 wateryong 的帖子$ z% X3 |: m; K* P* [" }' ~) o" Q( K

$ N3 B7 |$ _8 g" ~$ X最近在做慢病毒转染脐带间充质。能请教一下吗？2 C8 u/ b4 J( O. ?. J) `( g
1、包装细胞接种第二天融合达50%，文献有报道到70%再转染，50%效率是不是高些呢？; l+ P) @( {' E, N7 m* W! w7 M8 x
2、为什么要用无双抗的培养液配制病毒液呢？- V8 v  f. z* H' }4 N9 Q* o
3、提高血清浓度，10%？（因为我用的是2%血清的培养基增殖培养的~）；转染前用293细胞测滴度不？
( \( F4 T2 ?5 I2 v9 h) s7 X4、文献报道MSC使用慢病毒转染MOI值比较高（10），并且同时还加入了polybrene（8ug/ml），请问您操作时加吗？还是自己梯度摸索呢？
# D. U7 `( @9 n3 V/ J" [
* G* O4 Y5 ]8 j. C. I
3 `2 t& b$ A+ M# p; ~问题很多，见谅啊~~很是头疼，因为做了一次，没有明显的转染阳性的。。。。

细胞海洋

回复 quge_00 的帖子# E: h6 p( z0 n- @- u8 D0 b

9 E! e+ f+ s3 d7 @建议你发新帖提问
* o5 e9 Q$ J+ W6 T0 ~2 }