成骨诱导11天后Alizarin Red staining，求鉴定

hxf_86

! P* l  b8 C; n# S" n* `
5 G5 v1 t& d$ ?( x- T4 P2 V! i
这是我成骨诱导11天后的钙结节染色，大概流程如下5 P; `9 M2 J3 z* ^6 }  p: ^5 V
PBS洗2遍，95%酒精固定10min，ddH2O洗3遍，然后0.1%Alizarin Red染色（做了个时间梯度，分别是5,15,30min），然后ddH2O洗3遍，拍照。下面是图片，求各位大侠鉴定~谢谢~2 G( ~# [! N# E* ]( x
染色30min-1
1 r, O+ E0 a/ B: @染色30min-2
* W' p$ f  b  x染色15min
  U" B3 E- g! H( e染色5min

wangzhiqi86

不清楚为什么要用双氧水处理呢？固定洗涤后，直接染色就好了啊

luoziwei

wangzhiqi86 发表于 2011-12-8 22:54 ' U* B4 W2 t* U. F& o
不清楚为什么要用双氧水处理呢？固定洗涤后，直接染色就好了啊

3 O  @, w3 |0 p4 v大哥，那是ddH2O，是双蒸水，不是双氧水

luoziwei

楼主是不是把茜素红染色液的pH调高了，偏碱性的染色就是不太正。不好说你的染色是不是钙结节，当然我也遇到过这种染色。从我的经验来说，如果ph控制在5以下的话，就有60%的可能性不是的。

wangzhiqi86

回复 luoziwei 的帖子
( y, d, J5 p0 a& ?# _
6 b5 }( C8 s3 K; j9 t# y不好意思，看错了，我还纳闷，只有免疫组化里面才会用到双氧水啊。茜素红染色确实和染料的pH值有关

tjutiger

所用细胞是MSC么？11天就开始染色。。。

ljzmy82

MSC诱导分化吗，要是干细胞分化没有这么快的呀，得20天左右吧

细胞-77

回复 luoziwei 的帖子
: R# H$ D( M( s8 X
9 u1 ^2 b( ~. k9 X可否把你的茜素红试剂配制和染色步骤分享一下吗？谢谢

luoziwei

我已经在论坛里说了几次，都有详细步骤的，你可以查看看嘛

hxf_86

luoziwei 发表于 2011-12-9 10:03 7 r" n/ U0 B# F' ^% N' Q
楼主是不是把茜素红染色液的pH调高了，偏碱性的染色就是不太正。不好说你的染色是不是钙结节，当然我也遇到 ...

3 h- W. i8 k/ e- I: [9 z9 T你好，谢谢你的回帖~我把PH调到8.3了。那请问你PH调到多少为合适呢？