细胞培养

新疆八钢

SW1990有同道培养过吗？一定要用L-15培养基

lanxiubala

你是讲干细胞培养还是普通的贴壁培养啊？普通贴壁培养我们用的DMEM+10%胎牛血清

king8

SW1990细胞使用DMEM培养基（含10%小牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素）即可
+ Z$ T) p/ a' s! {9 E* ]: f不过有时会出现细胞不贴壁，或是少部分贴壁后隔日就会死亡
7 ]% L) ]4 D% m# _7 C+ {0 _! }5 a要注意冻存复苏环节，选择细胞状态好的进行冻存
  |; N' K2 Z# a) k我常用的冻存步骤：$ r- k' E2 |7 i- y7 n
冻存液配方：6：3：1（无血清培养基，血清，DMSO）
/ K! h. P# T5 B. T; I. {胰酶消化，培养基吹打，离心（800rpm*5min）" g/ u5 _& j" }7 B) h
吸去上清液，加入冻存液吹打均匀即可。用的冻存管是进口的1 `1 n3 |0 S$ |* A/ i. c" ~& H4 r
直接放入-70冰箱24小时后，转移至液氮罐中
$ F' Y4 M4 e' ~& B& A& O复苏步骤：从液氮中拿出之后，很快于37°水浴中溶解，冻存管里面液体要完全溶解
5 n4 Z1 I+ h9 y5 j5 @! Z然后离心800rpm*5min，超净台下吸去上清，用新鲜培养基吹打均匀，是细胞完全分散开，然后移入皿中孵育。
* z, {; Q$ N9 ]2 Y" b$ i, L! n3 ~希望对你有所帮助。

lanxiubala

回复 king8 的帖子: U  c7 c+ Y% n, g# Q; z( \
- l3 B& M: \9 _1 y7 E& T! R7 p5 {
你们冻存不是按照四度，负二十，负八十这样的步骤来的？？？

111111111111

回复 lanxiubala 的帖子
9 _, C3 r, V' d
  Y6 ~7 e. s/ C1 I* f" S3 B7 r您好，正常是4  ——  -20  ——  -70  ——  液氮
& e6 e3 c3 ], R" d. \4 b$ A但是现在有一种冻存盒，里面盛了异戊醇，可以使要冻存的细胞缓慢降温，因此可以直接先放置-70，随后转入液氮中

111111111111

111111111111 发表于 2011-12-21 19:45
; x9 G6 q3 }% D' H# n+ i& W* v+ ?回复 lanxiubala 的帖子
: ]0 y) r8 J! J/ }5 R0 u0 ~5 @7 g( ~6 P" ]
您好，正常是4  ——  -20  ——  -70  ——  液氮

# K" y, n" r* H6 `) p" ]
补充，-70，-80均可。不同实验室温度不同。但二者均可。