传代后贴壁细胞只有一半。为什么？

jss667795

我养的胚胎骨髓间充质干细胞，原代细胞长得挺好，传代之后总有一半细胞不贴壁。我用的是GIBCO的胰酶。稀释五倍使用的。消化时间一分半。10%FBS和培养液中和后，1500r/min离心5分钟去掉胰酶。然后重悬。传代比例1:3.
" ^! h; h8 [( C: K- a请问我哪里出了问题呢？如果不贴壁，要不要去除不贴壁细胞呢？我总怕会对贴壁细胞有影响。因为贴壁的细胞长势和状态还很好的，

sunny2829

操作似乎没什么问题~~~* \* ?/ I0 P( x+ W
可能是培养的细胞不是很纯，有一些悬浮的细胞，我建议还是去掉吧~~~

meister

1.原代细胞不纯。
# e# @! ^8 ]; O: d+ f8 a2.部分细胞贴壁能力较弱，非间充质干细胞，没有关系，如果传代后仍旧如此，估计胰酶消化有问题。
# c' W; i: w: W# P3.如果贴壁仍旧不好， 可以包被培养瓶

andylee824

胰酶的浓度调到10倍试试怎么样。2天还飘着的那些建议半换液撤掉。

干细胞狂想

你可以1000r，然后1传2，第二天换液，把不贴壁的洗掉~ 可能也是传代过程造成细胞损伤不贴壁啊~

liufutang

首先胰酶的浓度是不是过高了 这样的原代细胞最好胰酶的浓度要稀释。然后就是消化时间，在镜下观察时间不要过了，因为原代细胞比较杂 不同的细胞消化时间不同，最好多关注本身需要的细胞就可以。 上面有漂浮细胞只要贴壁细胞状态还好，尽早吸走扔掉。

493512112

1、有一些非间充质干细胞是不会贴壁的
3 c) m9 B3 K, M2、传代的过程中细胞损伤过重，可能是胰酶消化时间过长或者浓度过大的原因% C! |+ w% {4 J! r  w! L
3、一些老的细胞传代时胰酶消化后，会死去，你可以记下活力就知道了。

天枰2012

如果贴壁仍旧不好， 可以包被培养瓶

请问怎么包被培养瓶啊？谢谢

南宫燚岚

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' @5 @& M, G% ~0 c2 e; {( {/ c
& e3 ~1 I- h% l4 M包被可以用多聚赖氨酸，但是可能会比较贵，像我们养MEF时就是用1%的gelatin溶液37度包被1h差不多

meister

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" I" t! c1 l$ N8 x2 ?* d1 H$ [# C2 ]. k/ Q2 u" M5 u
不用多聚赖氨酸。
" Z2 W- o# ^7 g那个是做组化用的。
' w- v* v& @9 B% d6 k6 u# E. x* @# \* Ygelatin， fibronectin, collagen, laminin等等均可。
+ |4 |4 D8 |' ]$ ?gelatin最便宜