怎样培养无feeder的小鼠胚胎干细胞？

luochunhua

前短时间在feeder上养的细胞形态还不错，当传代到fibronectiin和gelatin上时不管是用条件培养基还是用一般的ESC培养基形态都不好，不成集落，成一个个细胞。请问有高手指点一下如何将feeder去掉，细胞形态还保持良好呢？

歪歪

我用DMEM加 2i/lif，明胶包被后贴ES，正在实验中，效果好的话再上传给大家。

yeya

撤feeder后可以先用在MEF上铺过的DMEM作为condition medium同时加2i和lif，过段时间再只用2i和lif甚至只用lif，慢慢优化条件试试吧……feeder貌似有很多支持ES的因子，不只是2i所抑制的两条通路吧，所以一下子撤掉可能会很快分化……

Yedan

我说句废话啊……LZ你的ES不是很罕见的小鼠品系的吧，我的意思是你的ES是确定之前建系成功的，你只是想撤Feeder而已；还是你做的是，新的小鼠品系，建立了ES cell line，然后你想检测能不能Feeder-free culture？

igdb

同求解答啊。。。最近试了一下matrigel，用的正常的mES的培养基，从1:5到1:50各个梯度都不能维持mES正常的克隆形态。

song58

LZ用的啥细胞系？自己建的还是比较常见商品化的mES？
5 y1 ]) |0 S& U, W; F% D' v& s, ~我以前养R1的时候，直接撤去feeder，就养在gelatin上，其他条件都不变，R1长的还是好好的...

shangchunhua

这个问题困扰我很久了，我也需要无饲养层培养mES，看到国外paper中细胞长的都很好啊，我自己试验时从有饲养层改成无饲养层时，ES就很难形成克隆团了，大部分都分化了，看了很多帖子说需要驯化，但是有没有找到相关的protocol。希望有经验的大牛们能够不吝赐教啊，多讲一讲

igdb

回复 shangchunhua 的帖子5 N' w* t* M( O

* |! |5 \9 Q0 t那分享几篇有详细操作的文章吧？？

shangchunhua

回复 igdb 的帖子7 w$ b0 O2 o" d  a5 d8 g

, p% e5 ]* L" ?8 z. K你看清楚再问啊，我也没有详细资料啊

igdb

回复 shangchunhua 的帖子. g" M0 j$ D, W. s  P  \
8 t; J/ p; e* J" [+ l
看到国外paper中细胞长的都很好啊