转染-筛选-病毒

sizhengliu

今天想到一个问题，我们一般制备病毒是“质粒转染-收毒-丢弃包装细胞”，可不可以在质粒转染后，筛选稳定的细胞，来持续合成和收集病毒呢？

l19rna

细胞都被病毒裂解了哪来的稳定株，除非你加个可诱导启动子之类的

bigchock

不可以。( ?# ?/ E7 x1 W
1.细胞裂解才能产生大量的病毒颗粒6 Y- }  L( x. o: n* A* x* W
2.即使有稳定转染几率，一来包装的3-4种质粒也不可能按理想比例的同时稳定的表达。

Yedan

LZ说的是Adenovirus？这种病毒确实是收毒的时候要裂完细胞收的。9 l! V  g3 n: K& j. s3 T6 o
Retro的都是收上清的，那个时候细胞都裂掉了么？我孤陋寡闻了……
  W0 E# F  a& j! M, ]2 E7 A8 wPlat-E/A/G这类包装细胞不就是LZ说的稳转之后的细胞么

sizhengliu

回复 Yedan 的帖子, O$ E. F7 ]& h6 w. z2 `

: j8 ]7 X$ h% s8 [) w我说的是慢病毒。一般选293FT做包装细胞

sizhengliu

回复 bigchock 的帖子
/ p: n& D, b5 U2 [0 {: P
. O3 z5 [) b$ J& M6 K慢病毒是收集上清液的，需要细胞裂解么？

Yedan

回复 sizhengliu 的帖子! s( `& z$ ~2 I6 X9 j2 N
2 b) ^1 b* t" m& R' k
Lenti的我爱用293T包，LZ你的想法其实是很好的，因为每次转染3质粒太麻烦了。但是有个问题你考虑过么，每次包完毒的细胞都已经confluent，甚至都已经融合了，这样的细胞是没法继续要下去的.Plat包装系统其实就是符合你说的筛选稳定的细胞，可惜是retro的。

huangcong1988

如果细胞不破裂，慢病毒没法释放的，你再好好看看慢病毒包装的整个过程吧。质粒转染293T细胞以后，在293T细胞中形成构成病毒的RNA和蛋白外壳，然后宿主细胞（293T）裂解，释放慢病毒，然后我们才能收集病毒上清，所以说，经质粒转染收集病毒以后，细胞就已经裂解死亡，剩下的细胞，除非你这次收集病毒滴度很低，要么就是包毒能力差的细胞，所以转染后筛选收集细胞没用的

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子0 X0 ~( F* q( a, g2 U
% [; X1 W0 a% p5 u% Y- G& J
明白了，谢谢！

张也行

LZ提出这种想法可能也是觉得几个质粒共转染的方法有些麻烦吧。但是只所以这么做也是从安全的角度着想。以前的病毒生产方法确实很简单，但是却有包装出野生型病毒的可能，还是安全第一吧。