单克隆抗体的制备

chleiwu

The fused cells are cultured at a concentration at which each culture well is expected initially to contain only one hybridoma cell- q, s  O- _" t+ @1 D3 e& D. D
如何做到每个培养孔内只有一种杂交瘤细胞，若抗原具有多个抗原决定基，那么产生的就不止是一种抗体，若一个孔内含有可产生两种以上抗体的杂交瘤细胞，经抗原筛选最后该孔内扩增的就不止是一种杂交瘤细胞了，所以不明白每个孔内如何做到只有一种杂交瘤细胞？

mayansen1314

这要采用有限稀释法，网上有很多的protocol，不过有限稀释法比较繁琐，周期也比较长。大概需要2个月才能得到一株单克隆杂交瘤。但是如果条件具备的话你可以在显微镜下把细胞分成单个的然后转移到96孔板上，保证每孔一个细胞。这样的话效率极高，只要检测一次，就能确定哪株是阳性单克隆了。

yuhaoze

回复 mayansen1314 的帖子- N5 J) D, `; k7 }! m% R! M

7 A  U. }5 f8 p$ M我估计一般实验室达不到这种条件，要是能地话就太好了，只需要铺好了饲养层，再把细胞养起来就可以了，也不用挑。5 U2 K- Q( V& f
有专门这样的一套设备吗？

chleiwu

回复 mayansen1314 的帖子
/ O$ O. ^) E# C1 z% w# D5 A' o  r* N; ^3 C& Y3 M
多谢

mayansen1314

回复 yuhaoze 的帖子
5 o& e! {2 m* E% u9 p" k1 o6 l0 H" G
我们这边实验室有显微操作仪，做核移植用的，不过要用这个东西来做单克隆的杂交瘤简直有点牛刀杀鸡的味道，一般实验室估计也用不到，有限稀释法貌似是最通用的

yuhaoze

回复 mayansen1314 的帖子  H- |: ]; C, @5 S. f' [: B) _
! C6 P) K- {8 i$ s- t1 X
恩，呵呵。做了好多次单克隆筛选，还是不太喜欢有限稀释法。可能是技术不太好的原因吧！# G) U1 s5 W8 ^( B