大家养的大鼠MSC怎样消化的？？？

bnm789

大家养的大鼠MSC怎样消化的？？？加不加EDTA，加EDTA消化后离不离心？

天山飞鹤

2.5%胰酶+EDTA，培养箱中消化2min, 前面两次因为细胞不纯，消化时间可以延长，后面随着细胞变纯，越来越容易消化，担心EDTA对细胞的影响，可以将胰酶稀释一倍但需延长消化时间

wangzhiqi86

0.25%胰酶+0.02%EDTA，如果单纯的只是传细胞，那看到细胞像沙状从培养瓶底部流下时，就可以加含有血清的培养基中止消化了

signext

天山飞鹤 发表于 2012-1-4 08:42 / l7 N4 J; ~) I
2.5%胰酶+EDTA，培养箱中消化2min, 前面两次因为细胞不纯，消化时间可以延长，后面随着细胞变纯，越来越容易 ...

4 [; v, [* d. J+ H"前面两次因为细胞不纯，消化时间可以延长"
( h3 |2 b8 s+ }我的理解是 原代细胞因为帖壁更牢固，所以要多消化一段时间，我一般是4分钟( q& u4 @& z7 Q0 w0 Z/ J! x& h; m
而后面的不要消化超化两分钟，因为纯化MSC的方法就是靠传代，" w, L- {7 }0 b8 N' P# Z
很难消化的那些都不是干细胞，消化嘛 意思意思就可以了 干细胞很好下来的

sanfa

gibco 的0.25消化2分钟

bnm789

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0 y) }/ J9 |( T+ e7 }请问加多少ml，

天山飞鹤

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  t  `' K& @5 ^; y+ Y% l/ [2 Q; _+ A4 @
我一般2-3ml就够了

bnm789

" B) \. c( D% a2 I( y9 T7 O: n
' T5 k* V1 B1 `7 z& N3 ~. P: l回复 天山飞鹤 的帖子/ q) E: z+ d' f' p& z: ~8 I, Z

0 g; _+ G' Z! s! `/ G5 U, D8 e多大的瓶子  25平方厘米的吗，还是75的？

天山飞鹤

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5 s7 ]7 F- l  e& X. O& _# U' X; I& G, v, N8 b# p# T
但我养的时候，如果前面也只消化2-3min，消化下来的细胞量极少，后面传代就太慢了

漫游天龙八部

0.25%胰酶+0.02%EDTA1ml，25cm2，然后显微镜下观察，消化程度根据实验要求自己判断，不规定具体时间。