小鼠BMSCs消化经验及问题（到底是好消化，还是难消化？！）

jyf200383

经验：5 a  y0 d3 f6 v1 o
       去年养的两批c57 BMSCs （全骨髓培养法），不管是原代还是传代，都很难消化，试过用2×的胰酶（0.5%浓度）也得10min左右，而且还在瓶底剩余30%左右（细胞早就变园了，但是不管怎么晃动、拍打、吹打，都不下来的）感觉对细胞肯定有损伤，传到3代以后就不怎么见长了。4 a: y9 p$ c; c3 O. P: w0 ]' b* ?
    今年刚养的这一批前天刚传代，用了0.25%胰酶-EDTA (GIBICO进口原装)，并且每次都用分装好的1ml，现用现解冻，并且37℃预热10min，在保持温度的情况下迅速加入培养瓶，37℃孵箱孵育5min，发现消化效率大大提高，5min时在显微镜现观察，半数细胞已飘起，再晃动瓶子几下就全部飘起了。$ p5 {, y1 L8 h" Y* D# j" @
问题：  @1 R- v' P7 b) \
      去年到现在，看了很多关于小鼠骨髓间充质干细胞消化的帖子，但很多观点却是互相矛盾的，有人说MSC是先被消化下来的，或者说先消化下来的MSC活力比较好，利于接着往下养（包括昨天看的一篇07年2.8分的文章，也是选用胰酶+EDTA 2min内消化下来的）；但是有更多的人却说MSC是贴壁较牢固的一种细胞，应该是后消化下来的，甚至在一本细胞培养的书上也是说BMSC贴壁较强，较难消化。
( ~* r! Y7 K# o8 [: h6 I8 A/ Q% M    众所云云，让我很费解啊····不知道大家都有什么经验，或者看到过权威的方法，恳请不吝赐教！
! S6 Q$ E  T5 i- z' {+ ?P.S.请注意，这里说的是小鼠的BMSC，不是别的动物或人，也不是小鼠的其他组织的MSC，因为实在是存在差别，所以如果说的不是小鼠BMSC，还请注明，谢谢！

lvmaoshiwo

我们实验室也遇到过这种情况，来加完胰酶后放在培养箱里消化会好些，冬天环境温度毕竟很低，影响胰酶的消化效率。你是哪个实验室的，可以交流哦。我们也做小鼠。

SKC-SFC

是不是不同类型的BM-MSC不一样呢，我们实验室的BM-MSC室温消化2min，轻轻拍打，就全部下来了，如果及时加入终止液，细胞活力保持得还不错。

SKC-SFC

我所说的类型不同是物种的不同。

jyf200383

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1 B: f* D! \4 F# W( H2 p你好，我就是放在孵箱里消化呀~我天津眼科研究所，邮箱是283214830@qq.com/ P+ H5 L1 h3 J+ E! I1 Q
希望与您交流~！

jyf200383

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/ c  T: `& N* h( W( C- c
我们是C57小鼠 您的呢？

lvmaoshiwo

回复 jyf200383 的帖子" l& d. @$ k" ~* J8 B
+ h. V, ^3 Y3 j+ N% l. ?
你们干细胞传几代用啊 有没有做过细胞流式和成骨成脂诱导鉴定的？

jyf200383

回复 lvmaoshiwo 的帖子
# V6 u1 ]. L; A( C6 B1 w+ x* D
希望最少传到四五代以上，用的时候用2~3代的，但是现在传不到四五代，所以也还没做流式和诱导

xiaoyurly

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& e2 r1 Y5 I1 p+ Z' y1 |  e我们也做小鼠MSC培养，同样用C57，起先从骨髓分离，但是很难纯化而且消化难，5-10min不见有掉下来的，难消化的细胞一般不是好细胞，杂细胞居多，流式有超一半CD45+细胞存在，非MSC。后来我们尝试养脂肪来源的MSC，发现这个好多了，之前纯化消化的问题都木有了，胰酶消化2min基本就都掉下来了。

liluli0715

我们做的是人的msc，很容易消化，0.25%胰酶没经预热，2-3min绝大多数细胞也消化下来了。