酶消化法 分离培养间充质！

liluli0715

我们用二型胶原酶消化过脐带，根据脐带的长短及大小消化时间不一样，酶消化就是过滤有点麻烦，消化后细胞1-2就可贴壁，比组织贴壁快

细胞海洋

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! q% v" W6 e; g* X$ a, }
的确 可以说是相当不专业 主要是因为很多版主都很忙 所以绝大多数评分工作由我来完成。还望你原谅和理解。

nek314

方法其实有很多，用几型胶原酶的都有，还有的是试剂公司自己的试剂盒，胶原酶分的会比较好，就是成本贵一些，细胞也比较杂，需要慢慢清除

zhj1988

请问1000rpm 10min对细胞损伤不会很大吗，求解，大家一般用多少啊？

细胞海洋

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2 v7 h$ L( G2 ]: c0 a
- s+ B/ }" i3 r; c建议你发新帖提问

细胞干

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. [' J0 g. J/ D6 C/ ]* P- m' w/ V
. m) t$ u4 }# J6 Q, q& b看你什么时候离心了，如果是酶消化法原代培养的话，可以用梯度离心法，2500rpm 15分钟，弃上清后稀释 1500rpm 15min，弃上清稀释 800rpm 10min；如果是传代可以用1000rpm 10min

yingjie

Wharton胶组织的消化：
! e# R/ G( U( g1 q6 ^* O    Wharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的  i& o: L; B: {- T
小烧杯中，置于37度恒温培养箱中消化16—18h。
1 h% W! H9 R6 I; y    加入适当体积的PBSA（PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白，即BSA），一般是. n. q$ p" p$ z( E
胶原酶溶液体积的2倍，250g离心5分钟。# J- c/ ]4 l* i
    弃上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37度处理30
, S7 z% {! W9 A0 T分钟，
2 N8 r6 \1 P- s# E5 y; e    加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止消化。7 S" u  D7 `" @) G6 U2 D0 q
    1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.
1 _3 [5 T' [; d& o6 N    用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少
+ {/ f3 q8 m. R& u8 F5 U许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在: j- O9 Q2 Q5 T
1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.
% o0 K, \) r: c1 k; `效果的话,还行吧,就是细胞出来的块,不过处理过多,对细胞影响较大,不是时间赶的话最好采用贴壁法
# i1 i3 J( H+ W9 j  @% t( S

lyj-0017

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) T% ~3 n2 y7 }" [. q0 a$ t6 a  |- j, ~% A
可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢

lyj-0017

回复 liluli0715 的帖子$ W, {) w8 {+ k1 T/ P
/ ^4 h* d! f! `1 }( C. p2 Z
可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢

yanxm920

酶消化法会影响细胞的活力，建议用组织块法，获得的细胞活力和表型都非常好！