酶消化法 分离培养间充质！

liluli0715

我们用二型胶原酶消化过脐带，根据脐带的长短及大小消化时间不一样，酶消化就是过滤有点麻烦，消化后细胞1-2就可贴壁，比组织贴壁快

细胞海洋

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: s4 i  V5 ]) N( J1 x5 u, h! A5 `: c# ~) _1 a" m
的确 可以说是相当不专业 主要是因为很多版主都很忙 所以绝大多数评分工作由我来完成。还望你原谅和理解。

nek314

方法其实有很多，用几型胶原酶的都有，还有的是试剂公司自己的试剂盒，胶原酶分的会比较好，就是成本贵一些，细胞也比较杂，需要慢慢清除

zhj1988

请问1000rpm 10min对细胞损伤不会很大吗，求解，大家一般用多少啊？

细胞海洋

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细胞干

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/ p" u" ~7 i6 G+ {5 Q- g- p. W: C! @% G  w
看你什么时候离心了，如果是酶消化法原代培养的话，可以用梯度离心法，2500rpm 15分钟，弃上清后稀释 1500rpm 15min，弃上清稀释 800rpm 10min；如果是传代可以用1000rpm 10min

yingjie

Wharton胶组织的消化：
/ f/ ~& }8 |& H# c: ]5 X. C$ k    Wharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
4 C6 _# K2 K" K小烧杯中，置于37度恒温培养箱中消化16—18h。% F5 ?/ N" H; D8 w! M& Z7 r
    加入适当体积的PBSA（PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白，即BSA），一般是
7 l! r- S& i  Y( T# y; M9 K胶原酶溶液体积的2倍，250g离心5分钟。' c4 ^! r: e0 W9 t+ Z8 ?2 m
    弃上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37度处理30( b) l7 R0 I5 N/ N
分钟，" r. Z9 J% l" z+ E1 Q0 h# Y
    加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止消化。
7 c6 b) t6 w4 O( G/ ?: e8 ?7 A( Z$ ]    1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.
0 k3 j# v" M* K1 r* x% y    用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少
3 y, Z8 \7 X9 B3 V许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在
+ a, m- @% {' V* @& e8 F1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养." h/ I) [0 S8 I# X3 P8 Z3 J
效果的话,还行吧,就是细胞出来的块,不过处理过多,对细胞影响较大,不是时间赶的话最好采用贴壁法
8 D2 [$ {  x! B; q0 l: k5 o

lyj-0017

回复 liluli0715 的帖子! E: x$ J) s1 B% U- O
- H( Y# @: A) D2 B: r
可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢

lyj-0017

回复 liluli0715 的帖子4 s% j  ^/ e! f9 d

8 T8 R8 i  `* \2 x, G- x可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢

yanxm920

酶消化法会影响细胞的活力，建议用组织块法，获得的细胞活力和表型都非常好！