酶消化法 分离培养间充质！

帝国黑骑士

我用组织贴壁法，养间充质，想知道，酶消化法都怎么做的，效果如何！

xiaopingzeng318

1、准备好胰蛋白酶，浓度0.25%或0.125%均可；- p1 ?: Y; H) v' N& x- I
2、胰酶消化细胞：弃去培养液，用生理盐水洗涤一次，加入适量胰酶消化。
3 T: G' e+ w  Y+ H  P) T3、消化时间要自己摸索下，室温2-5分钟，中途可在镜下观察，大部分细胞变圆一半左右细胞漂浮时，既可终止，过久会使细胞损伤死亡等。用DMEM或者生理盐水终止消化，用管吹打瓶或皿，收集消化液，再用生理盐水洗涤一次收到剩余细胞。9 Y& u1 I0 e  F4 T! \- X, T2 i
4、将消化液离心，一般1000rmp离心10min。  {" \' S  B! U- c8 c( p+ T
4、离心后弃上清，加入原培养液重悬，吹匀，取10ul细胞进行细胞计数，继续传代或者其他实验

owenlion

你用什么组织做酶消化

owenlion

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& @1 u  \8 e9 I& x# ~( w/ [$ u3 F4 P1 f
应该针对不同组织选择不同的酶吧

帝国黑骑士

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& n7 y5 y' u7 L
, ^; |! R$ p1 ]: t! U& J脐带间充质组织！

单个核细胞

回复 帝国黑骑士 的帖子0 Y( T- K0 W( [
1 A, ?/ j+ ]$ |9 Q
论坛里搜一搜。) K5 M$ M) P0 H. S# p  H& [
http://www.stemcell8.cn/search.p ... mp;searchsubmit=yes

xiaopingzeng318

回复 帝国黑骑士 的帖子" O) ]  w. c" x; f& r5 H
7 ]; ^7 U4 Z# L- S  F' G: i
脐带间充质可以用胰酶消化

xiaopingzeng318

不好意思，没说的很明白，原代的话用组织块培养，结果不错，没有用过酶，我说的酶是指后面传代的

owenlion

这个评分的不专业

owenlion

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5 [' u9 ^* t# r' P1 i/ M) H8 Z* \4 I( R& Y
酶消化有点难度，还是不做的好，组织块养的细胞还好点