胰蛋白酶EDTA对我的EPC居然不起作用？！

henryjia

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* z% Y: J0 r0 a0 y4 q6 A胰蛋白酶EDTA对我的EPC居然不起作用？！这是怎么回事？消化了7.8分钟细胞都不脱壁。细胞是在10%血清培养基培养的，不纯。

henryjia

图片怎么贴不上来？急呀！

pailishi

胰酶的浓度？确定没失效？我们用0.01%的胰酶消化原代没任何问题，0.025的消化其它代数的也很好用啊，2-3分钟就行

细胞海洋

回复 henryjia 的帖子# }2 |% r% X# M1 O& ]0 [

: k! W0 P* O0 X3 r单个图片不要大于1000kb 裁剪一下吧

houbara

需要检讨一下，胰酶的出处，浓度，作用条件，时间等因素。

henryjia

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& u% Y: Q0 d3 W5 g" @; j$ R似乎有很多圆形成骨细胞，怎么去除呢？
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说明一下，我是希望可以从脐带血中提取MSC

redmaple

不同的细胞系消化时间不一样，我见过有消化20多分钟的，首先要用pbs洗，FBS使胰酶失活，用37度的胰酶消化，消化比较难的话，可以放在37度的温箱内数分钟。

redmaple

有些细胞对胰酶不是很敏感，长点时间很正常。

yyshpy

重新配胰酶吧，胰酶出问题的可能性最大，另外，消化之前要用PBS把残余的培养液洗干净，应该不会有问题，再试试吧

xbs530515

只要是细胞，就不应该消化不下来。可以考虑更换胰酶-EDTA，消化时，先用1ml胰酶-EDTA润洗细胞一次，吸弃。再重新加入1ml进行消化，放在37培养箱，每隔几分钟注意观察一下消化进程。应该就没有问题了。如果实在很难消化，可采用细胞刮。