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我的MMC也是配成母液后放了快一个月,后来用了一次,感觉效果也还行,没影响
: Q& E7 w. z: g4 Y$ i但是后来我还是分装了,冻负20里面,然后加锡纸避光. h+ k) O% A& s
之后冻着的MMC析出了紫黑色的结晶,感觉其实也没有影响,但是你在用之前,一定要把整个结晶融完,直至完全透明(还是呈淡紫色),才能用,不然这个紫黑色的结晶会使得大量细胞死亡(它就像炒菜的时候,菜里面的一坨盐巴)
/ g* X% h% G, r0 A3 V加入MMC母液的量要视你培养基的量和母液浓度而定,终浓度是10μg每ml,处理2.5h' y1 X4 O$ L' `" z0 d* e2 w
处理后可以用PBS洗了之后直接用,但是也可以先消化下来铺了再用,有的做得比较精细,消化下来后计数,然后再铺,这样比较好一点,因为直接用的话,可能细胞密度太大了,那么饲养层密度太大不是太好
2 y& z6 X+ b ?& J- b4 [养MEF直接10%的FBS就行了,而且不需要灭火,用高糖培养基就行了,没有注意具体成分(个人觉得丙酮酸钠和glutamin的影响不大),DMEM(gibco)就行了 |
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