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请教:终止胰酶消化作用的办法   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2012-3-12 22:52 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,一般用血清终止胰酶消化,如果用无血清培养,该用什么终止消化呢?知道有一种胰酶替代物可以不用终止,但是相比好贵啊。不知道能够抑制胰酶作用的东西都有哪些?在这里先谢谢各位的回答了。
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沙发
发表于 2012-3-12 22:58 |只看该作者
soybean inhibitor,不过价格比accutase还贵,如果我没记错了的话
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藤椅
发表于 2012-3-13 01:06 |只看该作者
你可以在消化结束的时候轻轻吸弃胰酶,不要吹打和加液体,吸干胰酶之后,再加培养液吹打,离心清洗几次之后就可以了。我们实验室有人这么做,感觉还可以。
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板凳
发表于 2012-3-13 05:48 |只看该作者
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我们这里条件有限,我从来没有用过终止液,用pbs重悬离心就可以了
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报纸
发表于 2012-3-13 08:52 |只看该作者
回复 上帝帮我转运吧 的帖子6 y. Q& Q( o! }  z# Y

6 X2 ?: C( o2 f8 P: x- _你如果没有专门的终止液,要严格掌握消化时间,在细胞被消化到球形还没有完全离开培养瓶底部壁的时候,小心吸走胰酶,加入无血清培养基吹打细胞成悬液,转移入离心管,离心反复冲洗2次,再接种。操作时,一定要注意动作轻柔,避免过多损伤细胞。
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地板
发表于 2012-3-13 09:05 |只看该作者
楼上说的我觉得是正确的方法,消化时间要控制的短一些
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发表于 2012-3-13 09:10 |只看该作者
自己配点终止液不就好了吗DMEM+FBS,我一般是这样终止的。
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发表于 2012-3-13 10:17 |只看该作者
胰酶替代物 TrypLE貌似不是很贵吧,比一般的trypsin/EDTA贵一点儿
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发表于 2012-3-13 10:20 |只看该作者
回复 新疆八钢 的帖子
( Y* R/ j, h' \( v& B* K' K0 `' ?2 \- g9 M
非常感谢。我要试试这个办法

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发表于 2012-3-13 10:36 |只看该作者
直接加PBS稀释 吹打下来离心也可以 PBS稍微多加一点  不放心的话可以重悬了再洗几次 还有就是一些细胞无血清培养 但是消化终止的时候是可以用DMEM+10%FBS终止的 我见培养的protocal上这么写了
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