求教！关于小鼠iPS细胞EB培养的几个问题！

ligangtiancai

RT，本人准备做鼠iPS的悬滴法培养EB，有如下问题：
9 K& s. K, k$ G+ D- W1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？* N# i' c3 L9 K
2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？. U& Q+ s, M: M9 `: ~3 _9 ?; t
3.悬滴之间间隔多少？
/ [$ C3 d3 |0 z: I# n5 G4 V4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？
; C  W. K( [+ p  `0 |5.其他需要注意的地方？4 A( `& w+ H) O1 m4 G+ e
           先行谢过，谢谢！

mohanmud

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# `) y  ]- @3 Z6 p/ X" f. j- _1 R1 n+ O$ V+ I" v8 e  {/ I
1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？
2 Y. ]( G. I6 W都没关系。
9 J/ ]+ q% R3 P: S, {5 ?! M. m0 R" f6 h
2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？
8 }% D" P( r; R. c2 ^( P一般500个细胞左右每滴，15-20 ul 培养基
6 E8 l+ I" q7 r2 [+ S
! U' ~0 A2 W2 a. \3.悬滴之间间隔多少
% M3 ]9 O( {  t7 E这个没固定要求，你操作时候只要两滴不会融合在一起就行了, L$ |9 W3 B7 v# O' `5 g

6 Z% q3 @" T; _, ~4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？6 u6 h( z+ G) G
两天之后EB稳定了加入培养基混一起培养就行。
7 \, Q+ e( M, Z! \1 Z2 o1 S! L, F& s3 X3 |, ~+ h
5.其他需要注意的地方
# p* {5 [1 Q- U7 q" Q. _6 f0 w可以试着suspension EB培养，方便多了，而且达到的效果和悬滴法差不多。$ v. k- r) _4 N9 O1 V* d9 ^

刘森泉

做过的能给个详细的protocol吗？非常感谢！

shangchunhua

回复 ligangtiancai 的帖子9 K1 V0 b# r5 m& N" a' l

4 M) H7 d+ i" m! q' Y$ m' N7 v提供两篇文献，楼主参考一下吧

ligangtiancai

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- d! }+ O: P& y3 V$ [2 P
6 U9 Y# G' a5 @" {& }8 B+ e谢谢，挺有帮助! 还有个问题，就是我想用25孔板做iPS的免疫荧光染色，不知没孔应该加多少的细胞量比较合适？谢谢

ligangtiancai

回复 shangchunhua 的帖子
4 X; m4 i2 o2 _; g! W; T/ j4 O+ c5 q& ~6 y: t% N% S0 q+ \" ^7 {
学习一下，太感谢了！

天龙八部

学习，感谢分享！