神经干细胞培养疑问

sicy

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( u7 f$ X. S+ g0 o
1、包被平皿：25μg/mL laminin加0.1%明胶混合，37度至少3h。大家怎么包被的？
! R: M, D  G: p/ T2、基础培养基加hLIF吗？bFGF和EGF浓度用多少？7 o% c4 X+ s5 x0 V
3、传代时接种浓度？我用的是0.05%胰酶消化，终止时加少量血清。请问加血清终止消化，会诱导分化吗？不加血清，又是怎么终止消化呢？* L2 a% t* H, T5 R! U
4、最常用的冻存液是什么？4 _. |% @6 u5 L* S
本人第一次做，恳请前辈解答困惑！万分感激。

jessewill

1.包被的时候，PLL和laminin分别包被，我用的浓度都是15ug/ml
  N' x4 S2 k7 j7 {" \- F2.不加LIF,bFGF EGF都是20ng/ml9 q. w7 i9 X( B# t: F
3.不用胰酶消化，机械吹打，血清容易分化
9 c0 Y$ g" B5 u% x4.10%DMSO+一般培养液

学无止境

jessewill 发表于 2012-3-22 16:40
2 _+ N+ _6 r6 N# G' L1 p1.包被的时候，PLL和laminin分别包被，我用的浓度都是15ug/ml; j6 b- w( c" c# o$ I, R
2.不加LIF,bFGF EGF都是20ng/ml& z" v& O; j1 J8 X
3.不用胰酶 ...

6 [4 ^$ L( v+ G3 s$ v' Q& U( c( N神经干的冻存液要是用“10%DMSO+一般培养液”的话，貌似复苏的活力是极低的。

jessewill

学无止境 发表于 2012-4-4 08:21
4 b4 v& F3 W7 ^+ x9 @+ x神经干的冻存液要是用“10%DMSO+一般培养液”的话，貌似复苏的活力是极低的。

+ O8 X- b, G7 L0 F8 f* A
是的，不过有没有什么更好的方案呢？9 ~& y  e2 W; A0 u9 e
我神经球传代，用机械吹散，然后聚合程度也极低，细胞状态不好。有什么好方案吗？