神经干细胞培养疑问

sicy

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1、包被平皿：25μg/mL laminin加0.1%明胶混合，37度至少3h。大家怎么包被的？" ~6 U" F# W- _, v0 I
2、基础培养基加hLIF吗？bFGF和EGF浓度用多少？4 T# j6 @9 Y% @, |
3、传代时接种浓度？我用的是0.05%胰酶消化，终止时加少量血清。请问加血清终止消化，会诱导分化吗？不加血清，又是怎么终止消化呢？
5 q3 V1 K+ c$ i# ]) j6 v* z4、最常用的冻存液是什么？5 X& G: C  y6 X; v2 L
本人第一次做，恳请前辈解答困惑！万分感激。

jessewill

1.包被的时候，PLL和laminin分别包被，我用的浓度都是15ug/ml# x( c' @. F+ e; ^6 z( ]
2.不加LIF,bFGF EGF都是20ng/ml* A# e9 h5 A: A, Q5 l$ C
3.不用胰酶消化，机械吹打，血清容易分化
- X- J$ W& I8 @4.10%DMSO+一般培养液

学无止境

jessewill 发表于 2012-3-22 16:40 7 ~/ `2 l# u8 H% T; w" ^  W
1.包被的时候，PLL和laminin分别包被，我用的浓度都是15ug/ml
8 i( W$ d) m* Q2 ~" W$ A2.不加LIF,bFGF EGF都是20ng/ml, T3 ?0 g$ w% f4 d" O
3.不用胰酶 ...

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神经干的冻存液要是用“10%DMSO+一般培养液”的话，貌似复苏的活力是极低的。

jessewill

学无止境 发表于 2012-4-4 08:21
' u2 Z, l0 ?1 ^) ^7 u8 P神经干的冻存液要是用“10%DMSO+一般培养液”的话，貌似复苏的活力是极低的。

3 t: W: L; H- U5 W# f( _8 v1 e
是的，不过有没有什么更好的方案呢？' r+ c1 V$ _! ^
我神经球传代，用机械吹散，然后聚合程度也极低，细胞状态不好。有什么好方案吗？